GFP и фиксация.

[tanchik]

(лопаясь от гордости): а вчера я на работе решила сложную техническую проблему. Всего-то экспериментов за пять в течение пары месяцев. Суть объяснять толку нет, так что проиллюстрирую словами, а для тех кто понимает цитометрию, и картинками под катом. Короче, то что в PNASе, Nature Immunology и остальных подобных журналах авторы смогли покрасить

Comments

[sciuro]

ЖАДНО, ЖАДНО ХОЧУ!
(и про секрет CXCR5 тоже хочу, если отдашь :) чисто из профессионального любопытства, я сама никогда не сталкивалась с этой проблемой но посмотреть могу...

[sciuro]

(у меня, конечно, есть куча идей, как можно повозиться с такой дурной прокраской... но эти перцы из ПНАС либо не заморочились, либо там все хитро)

[tanchik]

Там все надо слегка через одно место, чтоб работало. Фиксатор от одной компании с протоколом от фиксатора другой и никак иначе. ;) Ну это часть.

[sciuro]

Через мои руки прошло много разных GFP+ клеток, и они внезапно очень по-разному переносят фиксацию - была одна GFP+ перевиваемая лимфома, которая ВООБЩЕ ничем не убивалась, по-моему, но там такой силы был сигнал, что мне приходилось ND фильтр присобачивать к 525/15. А вот последний мой GFP был как та примадонна - криво посмотришь и он все, чпок. 

[f3]

Ты крута! Правда, наша биолог в лабе владеет только английским, я опухну пересказывать, да ещё и ошибусь в ста местах :))

[tanchik]

Если вы не работаете с GFP, то не надо мучаться, пожалуй. :)
А вот если работаете, то скажи ей, is it possible to fix GFP+ cells for flow? И услышь в ответ стенания, что это невозможно чисто технически.

[f3]

Ага :)) попробую.

[lenkao]

Я давно гордилась своими френдами - какие они у меня все талантливые и замечательные.
Но ты просто гений! Горжусь втройне.

[tanchik]

Гений - это все-таки для людей явно поумней.
А я технический трублешутер. Но крутой, похоже, чо. :))

[sliger]

Срочно создавать создавать продукт, а то сейчас есть позиция ученого, а завтра нету, а так есть план Б и вероятно свой маленький свечной заводик. В Швеции немало профессоров так себе на интересную жизнь заработали.

[tanchik]

Увы, свечной заводик мне не грозит. Я чужие готовые реагенты использую, просто чуток необычно. ;)

[moreless]

(заинтересованно) что, alexa488 поверх прокрашиваете?

[tanchik]

Нет, GFP удалось родной сохранить, без усиления чем-либо вторым этапом. :)

[sliger]

Хм, а почему они (лекторы на воркшопах) такое заявляли? Известно же, что если у тебя флюоресцентный белок в цитозоле, то высока вероятность похерить все фиксацией/пермеабилизацией метанолом (этанолом) в морозильнике, иногда просто вымывает нафиг все, а остается только что-то вменяемое при локализации белка в мембране. "Необычная" фиксация трихлоруксуской обычно спасает в таких особо запущеных случаях.

Да, если ваш протокол действительно работает универсально, то стоит его коммерциализировать. Иначе, все равно, рано или поздно ваш подход чуток модифицируют и тогда опять покупать продукт у "дяди", а так вы сами имеете шанс стать буратинкой с недеревянными мозгами и шансом работать на себя :).

[tanchik]

Да мой протокол не включает в себя ничего уникального, кроме как видоизменение протоколов на коммерческие киты для фиксации. Тут нечего коммерциализировать, совсем. :)
А фиксация нужна для FOXP3. Он внутриядерный, так что "легкие" или необычные способы фиксации, при которых есть шанс сохранить GFP, не прокатывают.

[sliger]

Это называется инновация процессинга, но вы правы, свечной заводик, увы, пока не грозит, пока.... может вы завтра что-то еще придумаете :)