GFP и фиксация.

[tanchik]

(лопаясь от гордости): а вчера я на работе решила сложную техническую проблему. Всего-то экспериментов за пять в течение пары месяцев. Суть объяснять толку нет, так что проиллюстрирую словами, а для тех кто понимает цитометрию, и картинками под катом. Короче, то что в PNASе, Nature Immunology и остальных подобных журналах авторы смогли покрасить

Comments

[ext_2364538]

А фиксировать то зачем? CXCR-ки надобно сразу мерять

[tanchik]

Ну не всегда то что надо в реальности совпадает с тем что надо по плану. :))

[ext_2364538]

C CCR и CXCR еще один трабл- на замороженных- размороженных семплах многие не поймаешь (как, к примеру CCR7 для naive/memory subsetting)

[tanchik]

Как недавно (мной) выяснилось, все эти маркеры надо колупать индивидуально. Например, CCR7 отлично красится и на замороженных, если они более-менее живые. Но надо делать инкубацию 30 минут при 37 градусах внутри инкубатора (чтоб и CO2 к ним приходил). Попробуйте - будет отлично. И на человеческих, и на мышиных.
CXCR5 напротив этого не переносит категорически.
Если у вас размороженные клетки дают много грязи и дохляка - обращайтесь. :) Научу морозить и размораживать так, что и пять лет спустя в жидком азоте ни viability, ни фенотип, ни деления в течение 4 дней не отличаются от свежих.

[ext_2364538]

PD-1 коэкспрессия, ага :)

[tanchik]

Ну у меня еще там Foxp3 и BCL6, оба только внутри. PD1 нормально superficial ловится.

[ext_2364538]

А флоу в "глянцах" весьма часто выглядит, как shit...Ибо деды-ревьюеры, в основном, в современных методах не понимают.

[tanchik]

Вот! Наконец-то я эту фразу вижу от кого-то еще. :)
А то ей богу, я говорю что оно shit, а на меня все смотрят косо - мол, PNAS же. Блин. И я тот же аргумент использую - мол, ну а кто красил-то, сам ОН, что ли? Нифига, технишен или студент. А потом послали на ревью тем, кто сам цитометрию в жизни ни разу не гонял.

[ext_2364538]

Именно так все и происходит.
Красивая цитометрия в Nature Imm бывает только от Марио

[tanchik]

Я знаю Марио только того что с усами и прыгает хорошо. :)

[dok_zlo]

статью напиши.

[tanchik]

Да нечего там, это ж просто решение технической задачки. :)

[uncle_grue]

Публикуйся, бабка!
Публикуйся, любка!
Публикуйся, ты моя
Сизая голубка!

:-)

[kormikblog]

10 баллов ))

[tanchik]

Да нечего там. Просто траблшутинг. Разве что из самой окраски что-то получится. ;)