Опытах протеина
Материалы и методы исследований. Исследования проводили на белых беспородных крысах-самцах массой 55 - 65 г (в опытах с содержанием в рационе А40) и 160 - 220 г (в опытах с содержанием на стандартном рационе вивария), которые отбирались для экспериментов по методу аналогов, содержались на карантине в течение 2 недель. С целью моделирования Е-гиповитаминоза крыс видсаджувалы на рацион А40 с добавлением к нему 35-40 МЕ витамина А и удерживали на нем в течение 3,5 месяцев. Животные контрольной группы дополнительно к основному рациону получали препарат фармакопейного витамина Е в дозе 100 МЕ / кг рациона.
Выделение субклеточных фракций проводили методом дифференциального центрифугирования за (Schneider VC 1948). Для исследования содержания CoQ и токоферола в гомогенате использовали методику, разработанную в отделе биохимии коферментов Института биохимии им. О.В. Палладина НАН Украины, позволяющая определять микроколичества токоферола и CoQ в незначительных количествах исследуемого материала (Донченко Г.В., 1979). Содержание протеина в гомогенате и субклеточных фракциях определяли по методу Лоури (Lowry OH, 1951), модифицированным для высоких концентраций протеина. Анализ содержания продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), проводили спектрофотометрически по методу (Стальная И.Д., 1977). Содержание диеновых конъюгатов определяли спектрофотометрически по методу (Стальная И.Д., 1977). Содержание продуктов окисления протеинов исследовали спектрофотометрически по (Дубинина Е.Е., 1995) с модификацией для гомогенатов тканей. Активность каталазы (EC 1.11.1.6) в пробах определяли спектрофотометрически по (Дубинина Е.Е., 1995). Активность супероксиддисмутазы (EC 1.15.1.1) изучали по (Misra HP, 1972). Энзиматическую активность NADH-CoQ-оксидоредуктазы (NQR) (EC 1.6.5.3) и сукцинат-CoQ-оксидоредуктазы (SQR) (EC 1.3.5.1) определяли по методу Тарасовой (Тарасова Н.В., 1976) и Ziegler (Ziegler D. , 1967) соответственно. Выделение веществ неомилюванои фракции гомогенатов и субклеточных фракций тканей животных и фракционирования CoQ, убихроменолу, β-оксистеролив, токоферолов и сквалена проводили по методу тонкослойной хроматографии (Донченко Г.В., 1979). Содержание убихроменолу определяли спектрофотометрически (Hemming FW, 1961).
Выделение субклеточных фракций проводили методом дифференциального центрифугирования за (Schneider VC 1948). Для исследования содержания CoQ и токоферола в гомогенате использовали методику, разработанную в отделе биохимии коферментов Института биохимии им. О.В. Палладина НАН Украины, позволяющая определять микроколичества токоферола и CoQ в незначительных количествах исследуемого материала (Донченко Г.В., 1979). Содержание протеина в гомогенате и субклеточных фракциях определяли по методу Лоури (Lowry OH, 1951), модифицированным для высоких концентраций протеина. Анализ содержания продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), проводили спектрофотометрически по методу (Стальная И.Д., 1977). Содержание диеновых конъюгатов определяли спектрофотометрически по методу (Стальная И.Д., 1977). Содержание продуктов окисления протеинов исследовали спектрофотометрически по (Дубинина Е.Е., 1995) с модификацией для гомогенатов тканей. Активность каталазы (EC 1.11.1.6) в пробах определяли спектрофотометрически по (Дубинина Е.Е., 1995). Активность супероксиддисмутазы (EC 1.15.1.1) изучали по (Misra HP, 1972). Энзиматическую активность NADH-CoQ-оксидоредуктазы (NQR) (EC 1.6.5.3) и сукцинат-CoQ-оксидоредуктазы (SQR) (EC 1.3.5.1) определяли по методу Тарасовой (Тарасова Н.В., 1976) и Ziegler (Ziegler D. , 1967) соответственно. Выделение веществ неомилюванои фракции гомогенатов и субклеточных фракций тканей животных и фракционирования CoQ, убихроменолу, β-оксистеролив, токоферолов и сквалена проводили по методу тонкослойной хроматографии (Донченко Г.В., 1979). Содержание убихроменолу определяли спектрофотометрически (Hemming FW, 1961).