Занимательная микроскопия: уши кролика
*
Пора возвращать рубрику о занимательной микроскопии. Давно ничего не рассказывала!
В этом году к нам обратился студент, который не захотел заморачиваться тренингами и самостоятельным микроскопированием, а попросил нас сделать всю работу за него. Так тоже можно, за отдельную плату. Принес слайды, объяснил, что на них, и в чем заключается эксперимент. Студент изучает механизмы рубцевания тканей и процессы восстановления кожных покровов после образования рубца на примере гипертрофических рубцов. А в качестве экспериментальной модели используются уши кроликов. Поскольку для меня это что-то новое, то хочется поделиться и показать красивые картинки, которые впрочем не несут пока никакой научной ценности. Ценных данных в них нет, только контрольный пристрел системы.
Введение
Рубец - это плотное образование из соединительной ткани, возникшее вследствие регенерации тканей после хирургического вмешательства, повреждения или воспаления (например, на коже после заживления раны). Рубцовая ткань состоит преимущественно из коллагена и отличается от тканей, которые она замещает, пониженными функциональными свойствами. Например, рубцы на коже более чувствительны к ультрафиолетовому излучению, в них не восстанавливаются потовые железы и волосяные фолликулы, а рубец в сердечной мышце после инфаркта миокарда не участвует в сокращении сердца и может приводить к сердечной недостаточности.
По количеству новообразованной ткани рубцы на коже подразделяются на гипертрофические и атрофические.
- При гипертрофических рубцах новой ткани образуется больше, чем было разрушено, таким образом рубец выступает над поверхностью кожи.
- При атрофических рубцах ткани образуется меньше, чем было разрушено.
Существует много способов, которые позволяют избавиться от подобных рубцов, начиная от удаления хирургически до использования разных препаратов. Тем не менее все известные способы несут в себе повышенный риск разных неприятных последствий. Поэтому идет активный поиск альтернативных препаратов, которые работали бы так же хорошо, но без последствий. Наш студент тестирует разные синтезированные вещества на предмет восстановления поврежденной ткани после рубцевания. В качестве модели используются уши кроликов. Точную процедуру я не знаю, но статьи подсказывают, что уши кроликов особым способом протыкают, чтобы создать повреждение, которое после заживления превратится рубец. Затем на рубец наносят курсом изучаемый препарат, а затем смотрят на степень восстановления ткани. Если она есть, конечно. И сравнивают с контрольными группами, которым уши не повреждали и которым препарат не наносили.
Для того, чтобы посмотреть на структуру тканей, готовят препараты. Одним из широко используемых способов окраски для оценки количества коллагена является окраска трихромом по Массону (Masson's trichrome stain). Есть несколько вариаций, но в основном красным окрашивается кератин и мышечные волокна, синим или зеленым коллаген и кости, розовым - цитоплазма, черным - ядра клеток.
С помощью этого окрашивания студент сможет оценить количество и качество коллагена в каждой группе и сделать выводы для каждого используемого препарата. Если коллагена стало меньше по сравнению с контрольной группой, и его структура более регулярная, то препарат определенно действует. Если нет, так нет. На самом деле все сложнее и включает в себя несколько разных тестов и способов анализа, но я упрощаю.
Для примера нашла картинку из статьи. Здесь показывают (А) как выглядят неповреженные коллагеновые волокна и (B) поврежденные в рубцевой ткани.
Картинки
Фотографии сделаны с помощью Leica DM6B Widefield Fluorescence microscope в белом свете (bright field imaging) с использованием функции tile scanning. Это когда микроскоп сканирует выбранную область слайда, а потом сшивает все изображения в одну картинку. Объектив 10х (увеличение в 100 раз).
У студента было два типа слайдов с разной окраской. Один - классический трихром, второй - "легкий" трихром. По цвету они немного отличаются, но не несут никакой принципиальной разницы. Какой из них использовать - дело вкуса и особенностей эксперимента.
Окраска №1.
Окраска №2.
Что мы тут видим?
Кругляшком отмечена область, в которой будут детально исследовать состояние коллагена. Именно там сделали прокалывание, во время которого случайно повредили хрящ. На картинке я отметила, как выглядит здоровый хрящ, а где он поврежден.
И еще немного картинок вырезанных из области, которую будут изучать отдельно. Поскольку я делала "слепое микроскопирование", я не знаю, где контрольная группа, где тестовая, и есть ли они тут. Просто картинки, где нужно смотреть на синий цвет, которым окрашен коллаген. Я не гистолог, поэтому подробно о том, что мы тут видим, рассказать не могу. Но слои кожи разделены очень четко.
Это схематичное изображение кожи человека, чтобы приблизительно представлять, на что мы смотрим.
*
Пора возвращать рубрику о занимательной микроскопии. Давно ничего не рассказывала!
В этом году к нам обратился студент, который не захотел заморачиваться тренингами и самостоятельным микроскопированием, а попросил нас сделать всю работу за него. Так тоже можно, за отдельную плату. Принес слайды, объяснил, что на них, и в чем заключается эксперимент. Студент изучает механизмы рубцевания тканей и процессы восстановления кожных покровов после образования рубца на примере гипертрофических рубцов. А в качестве экспериментальной модели используются уши кроликов. Поскольку для меня это что-то новое, то хочется поделиться и показать красивые картинки, которые впрочем не несут пока никакой научной ценности. Ценных данных в них нет, только контрольный пристрел системы.
Введение
Рубец - это плотное образование из соединительной ткани, возникшее вследствие регенерации тканей после хирургического вмешательства, повреждения или воспаления (например, на коже после заживления раны). Рубцовая ткань состоит преимущественно из коллагена и отличается от тканей, которые она замещает, пониженными функциональными свойствами. Например, рубцы на коже более чувствительны к ультрафиолетовому излучению, в них не восстанавливаются потовые железы и волосяные фолликулы, а рубец в сердечной мышце после инфаркта миокарда не участвует в сокращении сердца и может приводить к сердечной недостаточности.
По количеству новообразованной ткани рубцы на коже подразделяются на гипертрофические и атрофические.
- При гипертрофических рубцах новой ткани образуется больше, чем было разрушено, таким образом рубец выступает над поверхностью кожи.
- При атрофических рубцах ткани образуется меньше, чем было разрушено.
Существует много способов, которые позволяют избавиться от подобных рубцов, начиная от удаления хирургически до использования разных препаратов. Тем не менее все известные способы несут в себе повышенный риск разных неприятных последствий. Поэтому идет активный поиск альтернативных препаратов, которые работали бы так же хорошо, но без последствий. Наш студент тестирует разные синтезированные вещества на предмет восстановления поврежденной ткани после рубцевания. В качестве модели используются уши кроликов. Точную процедуру я не знаю, но статьи подсказывают, что уши кроликов особым способом протыкают, чтобы создать повреждение, которое после заживления превратится рубец. Затем на рубец наносят курсом изучаемый препарат, а затем смотрят на степень восстановления ткани. Если она есть, конечно. И сравнивают с контрольными группами, которым уши не повреждали и которым препарат не наносили.
Для того, чтобы посмотреть на структуру тканей, готовят препараты. Одним из широко используемых способов окраски для оценки количества коллагена является окраска трихромом по Массону (Masson's trichrome stain). Есть несколько вариаций, но в основном красным окрашивается кератин и мышечные волокна, синим или зеленым коллаген и кости, розовым - цитоплазма, черным - ядра клеток.
С помощью этого окрашивания студент сможет оценить количество и качество коллагена в каждой группе и сделать выводы для каждого используемого препарата. Если коллагена стало меньше по сравнению с контрольной группой, и его структура более регулярная, то препарат определенно действует. Если нет, так нет. На самом деле все сложнее и включает в себя несколько разных тестов и способов анализа, но я упрощаю.
Для примера нашла картинку из статьи. Здесь показывают (А) как выглядят неповреженные коллагеновые волокна и (B) поврежденные в рубцевой ткани.
Картинки
Фотографии сделаны с помощью Leica DM6B Widefield Fluorescence microscope в белом свете (bright field imaging) с использованием функции tile scanning. Это когда микроскоп сканирует выбранную область слайда, а потом сшивает все изображения в одну картинку. Объектив 10х (увеличение в 100 раз).
У студента было два типа слайдов с разной окраской. Один - классический трихром, второй - "легкий" трихром. По цвету они немного отличаются, но не несут никакой принципиальной разницы. Какой из них использовать - дело вкуса и особенностей эксперимента.
Окраска №1.
Окраска №2.
Что мы тут видим?
Кругляшком отмечена область, в которой будут детально исследовать состояние коллагена. Именно там сделали прокалывание, во время которого случайно повредили хрящ. На картинке я отметила, как выглядит здоровый хрящ, а где он поврежден.
И еще немного картинок вырезанных из области, которую будут изучать отдельно. Поскольку я делала "слепое микроскопирование", я не знаю, где контрольная группа, где тестовая, и есть ли они тут. Просто картинки, где нужно смотреть на синий цвет, которым окрашен коллаген. Я не гистолог, поэтому подробно о том, что мы тут видим, рассказать не могу. Но слои кожи разделены очень четко.
Это схематичное изображение кожи человека, чтобы приблизительно представлять, на что мы смотрим.
*