Разработка метода
Это одновременно и самая интересная, и самая сложная, и самая гадкая задача. В разработку хроматографического метода может включаться только подбор условий разделения (подвижная фаза, колонка, скорость, температура, детектирование и т. д.). Но, как правило, кроме этого нужно разработать и процесс извлечения аналита из матрицы.
Здесь тоже все интересно и погано одновременно. В большинстве случаев извлечения можно найти в публикациях, но их всегда нужно перепроверять и практически всегда вносить изменения, поскольку точного попадания «матрица-аналит» практически не бывает. А если и бывает, то матрицы различаются даже между двумя географическими областями.
Например, в Белоруссии будет один состав смеси, из которой нужно извлечь аналит, в Вологодской области - похожий, но иной. Поэтому аналит в смеси из Белоруссии может хорошо извлекаться, а в смеси из Вологодской области - не очень. А при концентрациях на уровне микрограммов на грамм это важно, ибо у каждого способа детектирования есть предельная чувствительность и уровень концентрации аналита, при котором его содержание в пробе можно определить количественно.
Вот, на видео - первый этап разработки извлечения - процесс экстракции токоферола из матрицы.
Взята матрица, в которой токоферола заведомо нет на уровне чувствительности детектора. В матрицу добавлен стандарт токоферола (чистое вещество с известной концентрацией) в известном количестве.
После нескольких дней выдержки и регулярного перемешивания проводим извлечение токоферола из матрицы гексаном высокой чистоты. Но вместе с токоферолом гексан экстрагирует и ретинолы, и жиры, и вообще все, что подобно жирам и в жирах растворяется. А попутно извлекаются всякие прочие вещества.
На втором этапе нужно разработать порядок очистки экстракта от посторонних веществ. И уже на последнем этапе - подготовить пробу, пригодную для анализа.
Обычно это занимает несколько дней. Делается несколько десятков извлечений из одной и той же матрицы с разным добавлением аналита, из разных навесок, с разным количеством растворителя, меняются процессы очистки и т. д.
И это только первая часть работы. Поэтому лично я терпеть не могу этот интереснейший процесс, хотя мне и нравится заниматься этой отвратительной ерундой).