«Ингибитор панкреатической амилазы как ингредиент функционального питания».
Во введении изложены актуальность темы диссертационной работы, сформулированы цель и задачи исследования, отражены научная новизна и практическое значение полученных результатов, их апробацию, определены личный вклад соискателя в проводимых исследованиях и публикациях по теме диссертационной работы.
В первом разделе рассмотрен растительные источники ингибитора панкреатической амилазы, механизм ингибирования панкреатической амилазы, химические и биотехнологические способы его изъятия из сырья, использование растительного ингибитора в составе биологически активных добавок и продуктов питания, а также применение в медицине .
Во втором разделе «Материалы и методы исследований» изложены сведения об объектах и методы исследований и этапы переработки борошенець овса с получением биологически активного вещества и добавки. Схему направлений исследований приведены на рис. 1.
Основную часть исследований было проведено в лабораториях кафедр пищевой химии и биохимии, микробиологии и физиологии питания Одесской национальной академии пищевых технологий, в лабораториях биохимии и физиологии растений Одесского селекционно-генетического института национального центра семеноведения и сортоизучения УААН, в лабораториях физико-химических основ биотехнологии отдела медицинской химии Физико-химического научно-исследовательского института им. Богатского, Центральной санитарно-эпидемиологической станции, в лаборатории биохимической фармакологии ГП «Государственный национального центра лекарственных средств».
Охарактеризованы методов исследований как общенаучных, так и специальных химических и биохимических. Описаны методы выделения ингибитора панкреатической амилазы с борошенець овса с использованием аффинной хроматографии, характеристики физико-химических свойств, кинетического ингибирования панкреатической амилазы.
В третьем разделе «Выделение и характеристика ингибитора панкреатической амилазы» результаты исследований по скринингу растительного сырья на содержание ингибитора панкреатической амилазы показали, что максимальное ингибирующее действие по отношению к панкреатической амилазы проявляют экстракты овса и вторичного продукта его переработки - борошенець овса, что определяет их потенциальную перспективность как сырьевых источников изъятия ингибитора панкреатической амилазы.
Определено, что наибольшая ингибиторная активность наблюдается для водорастворимой фракции. Антиамилолитичною активностью обладает также фракция, полученная с использованием 0,5 М раствора NaCl.
Влияние состава буферной системы на выход ингибиторов амилолитических ферментов с борошенець овса оценивали по максимальному значению удельного ингибиторной активности.
Наибольшее значение удельной активности (0,196 ИО / мг белка) наблюдается при использовании 0,15 М NaСl в 0,1 М гидрокарбонатно буфере, рН 9,2, что свидетельствует о максимальный выход ингибитора из растительного сырья.
Стадии очистки ингибитора панкреатической α-амилазы с борошенець овса включали фракционировании белковой составляющей экстракта сульфатом аммиака и аффинную хроматографию на биоспецифического сорбенте α-амилаза-сефароза 4В.
Полученный белок-ингибитор очищали с помощью аффинной хроматографии (рис. 2, табл. 1). Хроматографическая кривая выхода белка из колонки (рис. 2) характеризуется тремя максимумами, при этом третий максимум сопровождается ингибиторной активностью.
В первом разделе рассмотрен растительные источники ингибитора панкреатической амилазы, механизм ингибирования панкреатической амилазы, химические и биотехнологические способы его изъятия из сырья, использование растительного ингибитора в составе биологически активных добавок и продуктов питания, а также применение в медицине .
Во втором разделе «Материалы и методы исследований» изложены сведения об объектах и методы исследований и этапы переработки борошенець овса с получением биологически активного вещества и добавки. Схему направлений исследований приведены на рис. 1.
Основную часть исследований было проведено в лабораториях кафедр пищевой химии и биохимии, микробиологии и физиологии питания Одесской национальной академии пищевых технологий, в лабораториях биохимии и физиологии растений Одесского селекционно-генетического института национального центра семеноведения и сортоизучения УААН, в лабораториях физико-химических основ биотехнологии отдела медицинской химии Физико-химического научно-исследовательского института им. Богатского, Центральной санитарно-эпидемиологической станции, в лаборатории биохимической фармакологии ГП «Государственный национального центра лекарственных средств».
Охарактеризованы методов исследований как общенаучных, так и специальных химических и биохимических. Описаны методы выделения ингибитора панкреатической амилазы с борошенець овса с использованием аффинной хроматографии, характеристики физико-химических свойств, кинетического ингибирования панкреатической амилазы.
В третьем разделе «Выделение и характеристика ингибитора панкреатической амилазы» результаты исследований по скринингу растительного сырья на содержание ингибитора панкреатической амилазы показали, что максимальное ингибирующее действие по отношению к панкреатической амилазы проявляют экстракты овса и вторичного продукта его переработки - борошенець овса, что определяет их потенциальную перспективность как сырьевых источников изъятия ингибитора панкреатической амилазы.
Определено, что наибольшая ингибиторная активность наблюдается для водорастворимой фракции. Антиамилолитичною активностью обладает также фракция, полученная с использованием 0,5 М раствора NaCl.
Влияние состава буферной системы на выход ингибиторов амилолитических ферментов с борошенець овса оценивали по максимальному значению удельного ингибиторной активности.
Наибольшее значение удельной активности (0,196 ИО / мг белка) наблюдается при использовании 0,15 М NaСl в 0,1 М гидрокарбонатно буфере, рН 9,2, что свидетельствует о максимальный выход ингибитора из растительного сырья.
Стадии очистки ингибитора панкреатической α-амилазы с борошенець овса включали фракционировании белковой составляющей экстракта сульфатом аммиака и аффинную хроматографию на биоспецифического сорбенте α-амилаза-сефароза 4В.
Полученный белок-ингибитор очищали с помощью аффинной хроматографии (рис. 2, табл. 1). Хроматографическая кривая выхода белка из колонки (рис. 2) характеризуется тремя максимумами, при этом третий максимум сопровождается ингибиторной активностью.