Источник репликации SV40 в клетках млекопитающих при отсутствии большого Т-антигена SV40
*Для специалистов
Положительный результат биопсии опухоли методом ПЦР через год после «в»
SV40 Большой Т-антиген
Ранее мы описали трансфицированные BNT162b2 клеточные линии OVCAR3, демонстрирующие репликацию плазмидной ДНК BNT162b2. Это озадачивает, поскольку источники репликации SV40 обычно требуют репликации SV40 Large Tumor-Antigen в клетках млекопитающих, а вакцины Pfizer не содержат SV40 Large T-Antigen.
Это привело меня к тестированию нового инструмента LLM, известного как Consensus .app, который похож на ChatGPT, настроенный на поиск литературы.
Ссылки на несколько цитируемых источников.
Мадзак и др.
Джаннокопулос
Пехачек
Для тех, кто не знаком с вакциной Pfizer, она содержит 3 начала репликации: SV40 ori, ColE1 ori и F1 начало репликации. Consensus.app нашел несколько статей, которые демонстрируют, что SV40 начала репликации могут реплицироваться в клетках млекопитающих без большого опухолевого антигена SV40. Требования - это начало ColE1 и F1, оба из которых существуют в плазмиде Pfizer. Третий механизм репликации SV40 ori требует доменов S/MAR, которые находятся в последовательностях бета-глобина. Вакцина Pfizer также имеет UTR бета-глобина, которые требуют дальнейшего изучения с точки зрения их способности эмулировать домен S/MAR.
Теперь, когда у нас есть механизм репликации, мы можем лучше объяснить собранные нами доказательства. Например, это объяснило бы варианты, которые мы видим в вакцине, только когда она трансфицирована в линии человеческих клеток. Когда мы секвенируем голую вакцину, мы не видим никаких вариантов в плазмидной основе. Когда мы секвенируем вакцину после того, как она была трансфицирована в клетки OVCAR3, мы видим SNP в началах репликации.
Это озадачивает, поскольку мы не ожидали увидеть такие высокочастотные варианты (более 10% прочтений, показывающих варианты в данном SNP) только из-за ошибок репликации полимеразы. Ошибки репликации полимеразы обычно имеют частоту от 1 на 10 000 до 1 на миллион, и у нас нет глубины секвенирования, чтобы увидеть их. Какой-то другой механизм должен обеспечивать такую высокую распространенность (14/100 прочтений, подтверждающих SNP). Эти документы, предоставленные Consensus.app, раскрывают механизм.
Важно, чтобы человек был железным.
Некоторые предполагают, что pUC ori (ColE1), используемые для экспрессии полимераз в наших наборах для ПЦР, могут способствовать обнаружению некоторых SNP под ColE1 ori. Это правдоподобно, но наши наборы обычно имеют сигналы NTC за пределами 35 CT для набора праймеров ColE1 ori. Мы секвенируем только образцы, у которых CT <28 (обычно меньше 22). Мы не ожидали бы увидеть >10% частоты аллелей в IGV с контаминантом 35CT (>7deltaCT составляет 1/128 нагрузки). Мы также видим эти SNP в происхождении SV40 и происхождении F1, которые не страдают от того, что находятся на заднем плане наборов полимеразы.
Это говорит о том, что ошибки происходят из-за репликации, и эти статьи подразумевают, что регионы, наиболее подверженные ошибкам репликации, находятся в гетеродуплексах, часто встречающихся в Origins of replication. Это лучше всего соответствует данным, которые мы наблюдали на сегодняшний день.
В итоге
1) Вакцина явно проникает в клетки, иначе эти мутации не были бы видны в наших данных секвенирования. Когда мы секвенируем только голую вакцину в качестве контроля, мы не видим никаких вариантов. Как только эта вакцина трансфицируется в человеческие клетки, появляются варианты.
2) ДНК реплицируется, и пока я не поигрался с Consensus.app, у меня не было внятного объяснения, почему это может происходить при отсутствии большого Т-антигена SV40.
3) Если ДНК реплицируется в клетках млекопитающих, то нам не нужны самоамплифицирующиеся мРНК-вакцины, поскольку население уже получило их с помощью вакцин компании Pfizer.
Каковы последствия инъекции ДНК, способной копировать себя?
Прежде всего, правила FDA, касающиеся 10 нг ДНК, теперь неактуальны, поскольку вы можете проехать на грузовике, не обращая внимания на эти правила, с ЛНП, содержащими ДНК с активными точками начала репликации млекопитающих.
Я всегда скептически относился к литературе о «выделении». Не потому, что у нас нет анекдотов или хороших объяснений гипотезы, выдвинутой доктором Пьером Кори и другими,
Медицинские размышления Пьера Кори
«Распространение» компонентов и продуктов вакцины мРНК от COVID от вакцинированных к невакцинированным. Часть 1
но потому что я просто не мог уложить в голове дозировку. Даже если мы действительно выделим небольшое количество экзосом, покрытых шипами, как предполагают Бансал и др ., доза шипа для реципиента будет настолько ничтожной, как она может вызвать болезнь у реципиента? Я также думаю, что большая часть вреда от вакцинации (но не все) связана с теорией болюса, выдвинутой
Марк Жирардо
Реципиенты, лишающиеся крови, не подвергаются этому фактору риска.
Расчет дозировки полностью меняется, если любая из этих экзосом содержит самореплицирующиеся ДНК или плазмиды. Небольшие количества сброшенных плазмид могут расширяться в реципиенте и, возможно, объяснять этот феномен.
Если ДНК реплицируется в клетках, это имеет глубокие последствия относительно персистенции ДНК у вакцинированных пациентов. Вот случай, когда лабораторная плазмида создала казедемический запуск тестов FP qPCR на нуклеокапсид. Плазмиды Pfizer также разработаны для репликации в E.coli, как в этой статье.
Любопытный случай нуклеокапсида, кодирующего плазмиды, колонизирующего персонал лабораторииCurious case of nucleocapsid encoding Plasmids colonizing Lab staff
АНАНДАМИДANANDAMIDE
··
15 АПРЕЛЯ 2023 Г.15 АПРЕЛЯ 2023 Г.
Интересная статья всплыла, пока я искал ингибиторы ДНКазы I. В ней документируется случай, когда сотрудники лаборатории BSL2 давали ложноположительные результаты тестов RT-qPCR на нуклеокапсид C19. Обычно это осталось бы незамеченным и было бы отнесено к одной серии бессимптомных случаев C19, но эти ребята копнули глубже. Похоже, что та же лаборатория работала с плазмидами, чт…
Прочитать полную историюRead full story
Как долго эта репликативно-компетентная вакцинная ДНК сохраняется в организме пациентов?
Мы находимся в процессе проведения qPCR для ДНК вакцины в образцах опухолей вакцинированных пациентов. Мы находим положительные образцы qPCR через 1 год после вакцинации, которые равны или превышают по количеству контрольный человеческий геном РНКП.
Что это значит? РНК-полимераза (РНКП) - это обычный анализ ПЦР, нацеленный на ген человека. Он используется в некоторых наборах ПЦР для COVID 19 в качестве внутреннего контроля. Он заметно отсутствовал в неаккуратном тесте ПЦР Кормана-Дростена, что делает этот тест клинически небрежным, поскольку у вас не было возможности сравнить вирусную РНК с количеством человеческих клеток, собранных с помощью мазка из носа. Поскольку количество собранных человеческих клеток в мазках из носа может различаться в 1000 раз, вирусную нагрузку невозможно рассчитать без контроля РНКП.
Если вы проводите qPCR для SV40 из вакцины Pfizer, и он находится в том же или большем количестве копий, чем ген человеческой РНК-полимеразы в образце год спустя, то ДНК SV40 не разбавляется с течением времени и, по-видимому, реплицируется с геномной ДНК. Это признак либо интеграции, либо эписомальной репликации ДНК SV40 с каждым делением клетки.
Это не ожидаемый результат. Давайте рассмотрим простую математику разбавления для задействованных здесь объемов.
Этот пациент получил 4 прививки от Pfizer. Последняя была за год до взятия этих биопсий. Он умер примерно через 30 дней после этой биопсии.
Учитывая, что 300 мкл-1200 мкл (1-4 дозы Pfizer) вакцины разбавлены в 87 000 мл объема тела (средний объем человеческого тела составляет 87 литров), мы должны увидеть разбавление ДНК вакцины по крайней мере в 64 000 раз в первый день, если вакцина равномерно распределена по всему объему тела. Если ДНК осталась в руке, как и заявлено, мы не должны увидеть ДНК в биопсиях опухолей толстой кишки.
Разведение в 64 000 раз проявится в ткани, которая на 16 CT позже (2^16) сигнала в ПЦР по сравнению с исходным сигналом ДНК, обнаруженным в 300 мкл вакцины.
Тем не менее, мы находим ткани, которые имеют CT, похожие на голую вакцину, год спустя. Это может произойти только в том случае, если ДНК вакцины интегрируется и амплифицируется или если ДНК реплицируется этими началами репликации как эписомальные плазмиды.
Если бы это было загрязнение вакциной из нашей лаборатории или лаборатории, собирающей образцы (INMODIA GmbH), мы должны были бы увидеть одинаковые CT для Spike, промотора SV40 и ColE1 Ori, поскольку вакцина содержит равные количества всех 3 мишеней в большинстве вакцин Pfizer. Анализ спайка, как ни странно, не обнаруживает никакой ДНК в этой биопсии, что необычно, поскольку концентрация ДНК спайка иногда на 6CT (раньше) выше в некоторых партиях Moderna из-за неполной обработки ДНКазой I гибридов РНК:ДНК. Шпайхер и др. демонстрируют этот артефакт, но он не присутствует в производственном процессе Pfizer во флаконах, которые мы исследовали на сегодняшний день.
Вместо этого мы наблюдаем смещения промотора SV40 и ColE1 Ori без сигнала спайка, а NTC очищены до CT 35.
Контаминация лабораторной вакцины также не дала бы вариантов, которые мы видим в данных последовательности. Как показано в нашем исследовании OVCAR3, если вы просто смешиваете голую ДНК вакцины с FFPE gDNA и секвенируете их, вы не увидите SNP, которые производят клетки. У нас есть очень специфическая сигнатура того, что эта ДНК была изменена путем трансфекции в клетки таким образом, что, я не думаю, что какой-либо исследователь мог бы взломать ее, чтобы создать мошенничество.
Почему в настоящее время мы видим только промотор SV40 и ColE1 Ori qPCR?
Возможно, некоторые флаконы содержат небольшие части пустого вектора. Это загрязняющая ДНК, где вставка шипа не была клонирована в плазмиду. Также возможно, что части последовательности шипа были удалены посредством репликации плазмиды с началами репликации ColE1, которые печально известны перестройками с более крупными плазмидами вставки. Мы видим некоторую последовательность шипа в данных, но у нас нет глубины покрытия, чтобы установить, что произошло в области последовательности шипа, на которую нацелен наш анализ qPCR.
TL/DR
Последовательность вакцины Pfizer может быть обнаружена через 1 год после вакцинации в биопсии колоректального рака с положительным результатом IHC. Самое длительное обнаружение нуклеиновых кислот после вакцинации осуществляется с помощью Roltgen (60 дней).
Очень низкие значения CT для этих образцов можно объяснить только репликационной компетентностью ДНК вакцины или интеграцией и амплификацией генома. Предварительное секвенирование этих образцов подтверждает, что qPCR не является сигналом вне целевого объекта и что в плазмидах существуют варианты. Это указывает на ошибки репликации или биотрансформацию ДНК вакцины. Более глубокое секвенирование проводится для разрешения интеграции или эписомальной репликации ДНК вакцины.
Некоторые подробности эксперимента по секвенированию
Мы выполнили 0,6X покрытие последовательности этого образца, чтобы оценить, насколько хорошо эта FFPE ДНК будет секвенироваться. FFPE ДНК печально известна для секвенирования, поскольку она часто сшита и содержит абазические сайты.
Секвенирование показало высокий уровень небольших вставок (фрагментированной ДНК), что вряд ли позволит обнаружить события интеграции. С тех пор мы построили новые библиотеки секвенирования с помощью новейшего набора для создания библиотек FFPE от NEB . Этот набор восстанавливает абазические сайты в ДНК перед созданием библиотек секвенирования Illumina, и всего за 8 циклов ПЦР мы имеем 30 нг/мкл в 30 мкл библиотеки для биопсий, взятых до и после смерти пациента.
Часть (20 мкл) ДНК из обеих этих библиотек была объединена и использована с методом обогащения зонда блокировки IDT xGEN . Этот процесс «выхватывает» всю ДНК, которая разделяет последовательность с плазмидами Pfizer и Moderna, поэтому секвенатор может сосредоточиться на плазмидоподобных последовательностях. Он предназначен для обеспечения более глубокого покрытия секвенированием областей образца, которые разделяют гомологию последовательностей с вакциной.
Вкратце, 214 биотинилированных 100-мерных зондов были синтезированы и использованы в качестве реагентов гибридизации. После гибридизации с вашей библиотекой Illumina магнитные шарики стрептавидина связывают биотин, а магнит используется для сбора вакциноподобных последовательностей.
Методы
Биопсии опухолей толстой кишки, которые были положительными по результатам IHC-анализа, были отобраны для анализа ДНК. ДНК была очищена компанией INMODIA, GmbH и отправлена в Medicinal Genomics в Беверли, Массачусетс, для количественной ПЦР и анализа последовательности.
2 мкл разбавленной 1:10 ДНК использовали в 18 мкл анализа qPCR, описанного ранее . Положительные образцы были отданы в приоритет для секвенирования с использованием набора для подготовки библиотеки ДНК NEBNext UltraShear™ FFPE (NEB #E6655). 14 мкл FFPE ДНК разбавляли в 15 мкл ddH20 для 29 мкл начального ввода в процесс подготовки библиотеки. 8 циклов ПЦР использовали для амплификации конечной библиотеки с помощью NEBNext ® Multiplex Oligos для Illumina ® (#E7600S).
Образцы ПЦР очищали с использованием 0,9X Ampure и оценивали на ленточной станции Agilent Tape Station по размеру и количеству вставок.
Секвенирование проводилось по 2 считываниям по 150 п.н. на приборе Illumina NovaSeq с двойными индексными штрихкодами.
Анализ
Чтения были обрезаны с помощью Trimmomatic и сопоставлены с GRCh38.p14 с помощью DRAGEN mapper от Illumina. Сопоставления чтений были визуализированы в IGV .
Обновление набора MedGen qPCRThe MedGen qPCR kit Update
АНАНДАМИДANANDAMIDE
··
7 ФЕВР.7 ФЕВР.
Эти наборы праймеров qPCR были проверены на вакцинах Pfizer, Moderna и Janssen. Анализ Spike положителен для всех 3 вакцин. Праймеры Vector Origin амплифицируют Pfizer и Moderna одинаково, но имеют задержку ~10CT с Janssen (другой вектор аденовируса).
https://anandamide.substack.com/p/sv40-origin-of-replication-in-mammalian?r=jhcie&utm_campaign=post&utm_medium=web&triedRedirect=true
Кевин МакКернан дает пояснение:
Требуется ли антиген большой опухоли SV40 для начала репликационной активности SV40?
Нет
Здесь мы обнаруживаем плазмидную ДНК Pfizer в биопсии опухоли толстой кишки через 1 год после вакцинации.
И это не малые количества ДНК. Это так много ДНК, что это можно объяснить только амплификацией плазмиды после вакцинации или интеграцией и амплификацией генома.
В промоторе SV40 обнаружены варианты, которые не существуют при секвенировании вакцины, что напрямую указывает на ошибки репликации после трансфекции в клетки млекопитающих.
Я буду делать доклад на эту тему на конференции Back to Basics на этой неделе в Уолтеме, Массачусетс.
Главная | Конференция «Назад к основам»: саммит по вопросам семьи, питания и здравоохранения | 19 октября 2024 г. | Уолтем, Массачусетс «Назад к основам» - это однодневная конференция, на которой выступят четыре эксперта-докладчика, созданная для информирования родителей, медицинских работников, специалистов в области целостной/интегрированной и консьерж-медицины о…https://www.backtobasicsconference.com
@ACMEAtomicAce У них может быть доступ только к посмертным нормальным биопсиям.
Не уверен, что они бы их брали, если бы это не было на краю опухоли?
Узнаю.
@JohnCav60020747 Если он присутствует только во многих биопсиях опухолей, является ли он причинным?
Я уверен, что эта гипотеза будет подвергнута критике, как и данные по мезотелиоме SV40.
Помните, что существует множество рецензируемых исследований, которые показывают, что устойчивость вакцины снижается в течение 30-60 дней в различных тканях.
Этот образец, оставшийся на 1 год, является исключением, но мы исследовали ткани, которые, вероятно, были обогащены для обнаружения (положительные образцы опухолей Spike IHC).
Хотя сторонники теории фактов критикуют это, напомните им, что нет никаких оправданных причин для того, чтобы последовательности SV40 были в их вакцине. Все это риск и никакой выгоды. У Moderna их нет, и это доказательство того, что они излишни.
У вас не должно быть млекопитающих источников репликации в вашей вакцине. Вы делаете это, только если вы получили свою плазмиду из своего подразделения генной терапии... Что Pfizer, как сообщается, на самом деле и делает.
• • •
Спасибо всем, кто находит этот пост полезным. Подпишитесь на т/к «Так победим! Статьи»
Учитывая возросший интерес к статинам добавил три ссылки в конце. Дополнительную информацию можно получить если воспользоваться функцией «поиска» у меня в ЖЖ.
Примечание: Все сокращение, замены и др. выполнены автором блога и не имеют никакого отношения к публикациям.(обычно в начале публикации и в заголовке). Сделано это по причине цензуры в некоторых соцсетях, которые борются с любым упоминаем ранней терапии и соответствующих лекарств.(в них идет скрин из т/к)
Отказ от ответственности: я не защищаю читателей, употребляющих иве или какие-либо другие препараты. Я не врач, а биохимик по образованию и никому не даю медицинских советов. Прежде чем принимать какие-либо лекарства, всегда консультируйтесь с лечащим врачом, которому доверяете.
ПОМНИТЕ. Вы находитесь под защитой Нюрнбергского кодекса и Хельсинской декларации. Хельсинкская декларация делает центральным документом этической исследовательской деятельности информированное согласие. Декларация определяет не только приемлемость известных и исследованных методов лечения, но принципы лечения больного альтернативными методами, к примеру, параграф 37 призван регулировать случаи, «когда не существует проверенного профилактического, диагностического или терапевтического метода. Когда существующие методы оказываются неэффективными, врач, получив обоснованное согласие пациента, должен иметь право применять непроверенные или новые профилактические, диагностические и терапевтические меры, если, по его мнению, они дают надежду на спасение жизни, восстановление здоровья или могут облегчить страдания. По мере возможности такие меры должны быть исследованы на предмет их безопасности и эффективности. Во всех случаях всю новую информацию следует регистрировать и, при необходимости, публиковать».
Полный текст ХД: https://budetlyanin108.livejournal.com/3489319.html
Подписывайтесь на мою страницу, всегда последние РКИ, КИ, обзор мировой прессы, статьи и рекомендации о передовых методах лечения К19 : https://www.facebook.com/veniamin.zaycev/
Здесь собрано все, что будет вам интересно, все объяснено в закрепленном посте, там же есть и схема-таблица с алгоритмом и применении иве:
https://www.facebook.com/ashominfo
Группа в фб «Так победим!» все вопросы по иве и ранней терапии:
https://www.facebook.com/groups/293522279068895
Телеграм-канал «Так победим!» на случай потери связи, там публикуется то, что идет в ЖЖ и не всегда идет в ФБ:
https://t.me/takpobedimsvz
Чат по иве в телеграме:
https://t.me/takpobedi
ЖЖ: https://budetlyanin108.livejournal.com/
"Книга отзывов"
часть 1: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118230.html
часть 2: https://budetlyanin108.livejournal.com/3118949.html
часть 3: https://budetlyanin108.livejournal.com/3211902.html
часть 4: https://budetlyanin108.livejournal.com/3417765.html
Ссылки по детоксикации спайк-белка:
https://budetlyanin108.livejournal.com/3144742.html
https://budetlyanin108.livejournal.com/3260643.html
https://budetlyanin108.livejournal.com/3596796.html
Полный протокол при Лонг, Пост и при НЯ после укола (ч.1)
https://budetlyanin108.livejournal.com/3289869.html
Детокс аутофагией:
https://budetlyanin108.livejournal.com/3613550.html
Протокол др. Питера Маккалоу:
https://budetlyanin108.livejournal.com/3601347.html
Назальные спреи
https://budetlyanin108.livejournal.com/3612201.html
РУБРИКАТОР чата Телеграм-канала «Так победим!»
Обзор противоопухолевых свойств перепрофилированных препаратов
В связи с тем, что участились просьбы дать ссылки на научные статьи и исследования по применению тех или иных перепрофилированных препаратов против рака, сделал этот пост на основе публикаций в моем ЖЖ. Возможно всё не удастся втиснуть в один пост из-за ограничений по количеству знаков (лимит 80К знаков), но можно будет воспользоваться «поиском» у меня в ЖЖ по ключевым словам для получения дополнительной информации.
https://budetlyanin108.livejournal.com/3655521.html
Обновление по дозировкам фенбендазола при раке от Др. У.Макиса:
https://budetlyanin108.livejournal.com/3758501.html?newpost=1
Нацеливание на связь митохондриальных стволовых клеток при лечении рака: гибридный ортомолекулярный протокол
https://budetlyanin108.livejournal.com/3878731.html
О СТАТИНАХ
Чем заменить статины
https://budetlyanin108.livejournal.com/3666513.html
Прежде чем принимать статины...
https://budetlyanin108.livejournal.com/3691623.html
СТАТИНЫ - величайший обман человечества
https://budetlyanin108.livejournal.com/3604461.html