Белок S (продолжение)
Закончим разбор предыдущей статьи. Мы остановились на том, что авторы получили псеводтипированный вирус VSV который нес на себе белок S из нового коронавируса, который они называют SARS-2. Этот вирус уже можно использовать для изучения свойств SARS-2.
Для того, чтобы попасть внутрь клетки, вирусу как правило нужно связаться с каким-нибудь белком на ее поверхности. Про SARS было известно, что он связывается с белком ACE2. Поскольку S белок SARS-2 очень похож на S белок SARS, то логично было предположить, что и он тоже использует ACE2.
Для того, чтобы это проверить, авторы первым делом попробовали заразить полученным вирусом целый набор клеточных линий, полученных от людей и от разных животных, что и показано на панели С. В верхней части картинки - заражение диким вирусом VSV, у которого белок оболочки довольно необычен тем, что позволяет вирусу заражать огромное количество самых разных клеток. Интересно, что несмотря на очень широкое использование этого свойства, до сих пор точно не определено, с чем же именно он связывается на поврехности клеток. Так или иначе, верхняя панель - это просто контроль на то, что все эти клеточные линии в принципе могут быть заражены.
На средней панели заражение псевдотипированным VSV несущим белок S от SARS. Видно, что он хорошо заражает парочку человеческих клеточных линий, другие чуть похуже или вообще нет, отлично клетки обезьян и хорошо собачьи. Остальные почти не заражает.
На нижней панели результаты с белком S от SARS-2. Видно, что результаты почти идентичные средней панели, что намекает на то, что этот вирус связывается с тем же белком на поверхности клеток, что и SARS (т.е. ACE2).
Для подтверждения этого предположения, делаем "контрольный выстрел" - панель А на картинке справа. Берем клетки BHK-21, которые (как видно из эксперимента выше) SARS-2 не заражает. Добавляем у них на поверхности человеческий белок ACE2 - теперь заражает; ACE2 из летучих мышей - тоже заражает; человеческий APN (рецептор для вируса MERS) - не заражает (но MERS заражает); человеческий DPP4 (рецептор для еще одного коронавируса) - не заражает.
На этом, казалось бы, можно остановиться, но авторы делают еще пару экспериментов, которые подчеркивают чем действительно хорошая работа отличается от средненькой. На панели В они делают дополнительный контроль - берут обезьяньи клетки Vero (которые как мы видим выше заражаются SARS и SARS-2) и перед инфекцией они добавляют к ним антитела против ACE2. Эти антитела связываются с этим ACE2 и не дают связаться с ним белку S, таким образом блокируя инфекцию вируса. И действительно - эти антитела блокируют как SARS, так и SARS-2, но не MERS. Таким образом они показывают, что инфекция этих клеток проходит именно через белок ACE2, а не какой-либо еще белок на их поверхности.
И самый последний контроль на панели С. Чтобы подтвердить, что результаты предыдущих экспериментов - не артефакт наблюдаемый лишь с псевдотипированным VSV вирусом, авторы повторили таки эксперимент с диким SARS-2, выделенным из пациента и показали что добавление ACE2 к клеткам BHK-21 ведет к активному распространению SARS-2 в этих клетках.