Удобрения, как средство для геноцида населения.
Кто нибудь из вас задумывался когда нибудь, почему за последние несколько десятилетий появилось очень много геев и лесбиянок? Почему мужчины с рождения теряют свою репродуктивную способность и желают сменить пол, чтобы стать женщинами, а у женщин вообще отсутствует материнский инстинкт и желание рожать детей?
Оказывается во всем виноваты гербициды, которым опрыскивают поля, они влияют на генетику животных и человека.
Атразин - тривиальное название гербицида из класса хлортриазинов. Используется для борьбы с широколиственными сорняками. Он был изобретён в 1958 году в лабораториях компании Geigy, вторым в серии 1,3,5-триазинов. Атразин получают в результате реакции цианурхлорида с этиламином и изопропиламином. Действие атразина основывается на ингибировании фотосинтеза растений. (Википедия).
ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ СТАТЬЯ
Атразин вызывает полную феминизацию и химическую кастрацию у самцов африканских когтистых лягушек ( Xenopus laevis )
Гербицид «Атразин» является одним из наиболее часто применяемых пестицидов в мире. В результате, атразин является наиболее часто обнаруживаемым пестицидным загрязнителем грунтовых, поверхностных и питьевых вод. Атразин также является мощным эндокринным нарушителем, который активен при низких, экологически значимых концентрациях. Предыдущие исследования показали, что атразин отрицательно влияет на развитие личинок амфибий. Настоящее исследование демонстрирует репродуктивные последствия воздействия атразина у взрослых амфибий.
Мужчины, подвергшиеся воздействию атразина, были демаскулинизированы (химически кастрированы) и полностью феминизированы как взрослые. Десять процентов зараженных генетических самцов превратились в функциональных самок, которые совмещались с неэкспонированными самцами и давали жизнеспособные яйца. Мужчины, подвергшиеся воздействию атразина, страдали от снижения уровня тестостерона, уменьшения размера размножающейся железы, демаскулинизированное / феминизированное развитие гортани, подавленное брачное поведение, снижение сперматогенеза и снижение фертильности. Эти данные согласуются с эффектами атразина, наблюдаемыми у других классов позвоночных. Настоящие результаты иллюстрируют роль, которую атразин и другие разрушающие эндокринную систему пестициды, вероятно, играют в глобальном снижении количества амфибий.
Атразин является одним из наиболее широко используемых пестицидов в мире. В одних только Соединенных Штатах ежегодно применяется около 80 миллионов фунтов, а атразин является наиболее распространенным пестицидным загрязнителем грунтовых и поверхностных вод ( 1 ). Атразин может транспортироваться на расстояние более 1000 км от места применения в результате осадков и, как следствие, загрязнять нетронутые места обитания, даже в отдаленных районах, где он не используется ( 2 , 3 ). Фактически, в Соединенных Штатах ежегодно в результате осадков выпадает более полумиллиона фунтов атразина ( 2 ).
В дополнение к его стойкости, мобильности и широко распространенному загрязнению воды, атразин также вызывает озабоченность, поскольку несколько исследований показали, что атразин является мощным эндокринным разрушителем, активным в диапазоне ppb (частей на миллиард) у рыб ( 4 , 5 ), земноводных ( 6 - 12 ), рептилии и клеточные линии человека ( 5 , 13 - 15 ) и в более высоких дозах (ppm) у рептилий ( 16 - 18 ), птиц ( 19 ) и лабораторных грызунов ( 20 - 28 ). Атразин, по-видимому, наиболее эффективен у амфибий, где он активен на уровне всего лишь 0,1 ч / млрд ( 6 -10 ) Хотя некоторые исследования показывают, что атразин не оказывает влияния на амфибий при определенных лабораторных условиях ( 29 , 30 ), в других исследованиях атразин уменьшает объем яичек; уменьшает количество половых клеток и клеток Сертоли ( 11 ); вызывает гермафродитизм ( 6 , 8 , 10 ); снижает уровень тестостерона ( 10 ); и вызывает оогенез яичек ( 7 - 9 , 31 ). Кроме того, загрязнение атразином связано с демаскулинизацией и феминизацией земноводных в сельскохозяйственных районах, где используется атразин ( 32) и напрямую коррелирует с загрязнением атразином в дикой природе ( 7 , 9 , 33 , 34 ).
Несмотря на обилие данных, полученных от личинок и недавно преобразованных амфибий, окончательное воздействие эффектов развития атразина на репродуктивную функцию и приспособленность в период половой зрелости, которые более тесно связаны с эффектами на уровне популяции и снижением количества амфибий, пока не изучено. В настоящем исследовании мы изучили долгосрочные эффекты воздействия атразина на репродуктивное развитие и функцию у полностью мужской популяции африканских когтистых лягушек ( Xenopus laevis ), возникающих при скрещивании самок ZZ (генетически измененных мужчин) с самцами ZZ ( СИ Материалы и методы). Преимущество использования этой популяции состоит в том, что 100% протестированных животных были генетическими самцами. В результате все наблюдаемые гермафродиты и женщины являются генетическими мужчинами, которые были изменены эндокринными нарушениями. Мы исследовали соотношение полов, уровень тестостерона, половой диморфизм, репродуктивное поведение и фертильность у мужчин, подвергавшихся воздействию атразина в дозе 2,5 ppb в течение всего периода личинок и до 3 лет после метаморфоза.
Результаты
Феминизации.
Все контрольные животные, выращенные до половой зрелости ( n = 40), были самцами, исходя из внешней морфологии, тогда как только 90% животных, получавших атразин (36 из 40), казались самцами в период половой зрелости (на основе наличие ороговевших подушечек на предплечьях и отсутствие клоакальных половых губ). У остальных 10% животных, подвергшихся воздействию атразина ( n = 4), отсутствовали видимые бугорковые накладки на предплечьях и были характерны выпуклые клоакальные половые губы, типичные для самок ( рис. 1 ).
Рисунок 1
Атразин феминизирован выставлен самцам. Клоака ( A - C ) и гонады ( D - F ) для контрольных самцов ( A и D ), самцов, подвергшихся атразину ( B и E ), и самок, подвергшихся воздействию атразина ( C и F ) ZZ (генетические самцы). ( G ) Самка, индуцированная атразином (генетический мужчина, ZZ), совокупляющаяся с необлученным мужским братом. ( H ) Та же пара, что и в G , производящая яйца. Яйца ( H ) были жизнеспособными и производили личинок, которые выжили до метаморфоза и в зрелом возрасте. Желтая окраска ( F ) является результатом фиксации в растворе Буина. Скобы ( Bи С ) показывают выступающие клоаки половые губы. (Шкала шкалы в A относится к A - C ; в D относится к D и E. )
Рис. 2
Индуцированные атразином самки экспрессировали ароматазу в своих половых железах. ( Вверху ) гены DMRT-1 и DM-W от репрезентативного контроля и подвергшихся воздействию атразина взрослых мужчин (M) и женщин (F). Морфологический пол назначался на основании наличия яичек (самцы) или яичников (самки). ( Средний и Нижний ) Cyp-19 ароматазы выражение из гонад одних и тех же животных генотипированных в Top , наряду с геном управления, rpL8.
Утрата мужских половых признаков.
Морфологическое доказательство.
У мужчин, подвергшихся воздействию атразина, были снижены уровни тестостерона в плазме по сравнению с контрольными мужчинами (ANOVA: F = 6,647, df = 1, P <0,025) при обследовании через 2 года после метаморфоза. В соответствии с уменьшением уровня тестостерона у мужчин, подвергшихся воздействию атразина, наблюдалось снижение зависимой от тестостерона морфологии, как описано ниже.
Брачные лапки и племенные железы.
Брачные накладки контрольных самцов были заметно темнее, чем у самцов, подвергшихся воздействию атразина ( рис. 3 А и В ). Хотя цвет не определялся количественно, гистологический анализ показал, что размер дермальных гнездных желез (определяемых по площади поперечного сечения самой большой размножающейся железы) был уменьшен у мужчин, получавших атразин (ANOVA: F = 11,589, df = 1, P <0,005; Рис. 3 C - E ). Этот эффект был специфичным для тестостерон-зависимых размножающихся желез ( 35 ), потому что размер слизистых и серозных (ядовитых) желез из одних и тех же гистологических срезов не подвергался воздействию атразина ( P> 0,05). Другие особенности размножающейся железы, которые были исследованы, существенно не отличались между обработками ( P > 0,05).
Рис. 3. Атразин-демаскулинизированная морфология у мужчин показана в брачных железах и гортани.
Морфология гортани.
Воздействие атразина изменило структуру, но не размер ( P > 0,05) гортани ( рис. 3 F - H ). Доля расширителя гортани, которая простиралась вентрально до тиоиралов, была больше у контрольных мужчин, чем у мужчин, получавших атразин, независимо от того, были ли расстояния определены с помощью прямых измерений (ANOVA: F = 11,974, df = 1, P <0,01; Рис. 3 I ) или по фактической длине мышцы, прослеживающей деление между скольжением и собственным расширителем гортани (ANOVA: F = 11,217, df = 1, P < 0,01; Рис. 3 J). Фактически, форма гортани у самцов, подвергшихся воздействию атразина, напоминала морфологию, типичную для нормальных (ZW) самок, поддерживаемых в нашей колонии ( рис. 3 H ).
Семенники.
Воздействие атразина привело к значительному снижению относительного числа канальцев яичка со зрелыми пучками сперматозоидов в 2007 году ( n = 18; ANOVA: F = 8,65, df = 1, P <0,01); то есть атразин уменьшал частоту канальцев со зрелыми сперматозоидами ( G- тест: G H = 13545,2, df = 15, P <0,001). Подобные эффекты не наблюдались ( P > 0,05) у животных ( n = 10) спустя 1 год, через 3 года после метаморфоза, в 2008 году. Другие особенности гонад, которые были исследованы, достоверно не отличались ( P > 0,05).
Поведенческие доказательства.
Спаривание выбора учебы.
В экспериментах, в которых контрольные мужчины и мужчины, получавшие атразин, конкурировали за женщин, контрольные мужчины превосходили мужчин-атразинов (достигнут амплекс) в трех из четырех исследованных испытаний, и только два мужчины, получавших атразин (в одном исследовании), получали амплекс ( G тест: G T = 61,82, df = 4, P <0,001; рис. 4 A ). Размер самца не различался между обработками и не влиял на способность самцов достигать амплексуса ( P > 0,05; рис. 4 B ). Контрольные мужчины имели значительно более высокие уровни тестостерона в присутствии женщин по сравнению с мужчинами, получавшими атразин, при анализе с помощью ANOVA ( F = 14,65, df = 1,Р <0,001; Рис. 4 C ) или по критерию Крускала-Уоллиса (χ 2 = 9,304, df = 1, P <0,002).
Рис. 4.
Контрольные самцы вытесняли самцов, подвергавшихся воздействию атразина, для совокупления с самками. Данные Amplexus из четырех испытаний по выбору партнера для контрольных (Con) и обработанных атразином (Atr) мужчин ( A ). Одиннадцать из 16 контрольных самцов превзошли атразиновых самцов за амплексус с самками. Только два мужчины, подвергшиеся воздействию атразина, в одном исследовании достигли амплексуса. Размер самца не влиял на успех размножения ( B ). Во всех четырех испытаниях не было никакой разницы ( P > 0,05) по размеру между контрольными (черные символы и столбики) и мужчинами, подвергшимися воздействию атразина (красные символы и столбцы). Кроме того, во всех исследованиях более мелкие индивидуумы из контрольной группы опережали более крупных лиц, подвергшихся воздействию атразина. Заполненные кружки показывают успешных мужчин, незакрашенные кружки показывают неудачных мужчин, а горизонтальные полосы показывают групповые средние значения. (C ) Уровни тестостерона для контрольных и обработанных атразином мужчин для всех четырех испытаний. Заполненные символы показывают успешных (амплитудных) мужчин, а открытые символы показывают неудачных мужчин. Сплошные горизонтальные столбцы показывают средние уровни тестостерона для успешных мужчин, а открытые столбцы показывают среднее для неудачных мужчин.
Рождаемость.
Репрезентативные яички для контрольных и обработанных атразином самцов с 2007 года показаны на рис. 5 А-Д . У мужчин, получавших атразин, показатели фертильности (доля оплодотворенных яиц) были значительно ниже при исследовании ANOVA ( F = 8,026, df = 1, P <0,01; рис. 5 E ) или при исследовании с использованием теста G со средней фертильностью для контролей. используется в качестве ожидаемой частоты ( G P = 10,434, df = 1, P <0,001). Даже обработанные атразином самцы с относительно высоким содержанием сперматозоидов (например, животные из исследования 2008 года) имели низкую фертильность ( рис. 5 F ).
Рис. 5.
Атразин уменьшал андроген-зависимую выработку спермы, поведение при спаривании и фертильность. ( A и C ) Наибольшие поперечные сечения яичка для репрезентативных контрольных ( A ) и атразиновых самцов ( C ) с 2007 года. ( B и D ) Увеличение отдельных канальцев для контрольных ( B ) и атразиновых ( D ) самцов. Стрелки в B и Dпоказать контур трубочек. Контрольные канальцы, как правило, заполнены зрелыми пучками сперматозоидов, в то время как у большинства канальцев у мужчин, подвергшихся воздействию атразина, отсутствуют зрелые пучки сперматозоидов и они почти пусты, только с вторичными сперматоцитами (SS) по периферии канальца. ( E ) Фертильность у контрольных (Con) и атразиновых (Atr) мужчин. Обобщенные данные исследования 2007 и 2008 гг. * P <0,005 (ANOVA). ( F) Плодородие в зависимости от содержания сперматозоидов (процентная доля трубочек со зрелыми пучками сперматозоидов) для контрольных мужчин (черные символы) и атразина, подвергшихся воздействию (красные символы) для исследований 2007 года (круги) и 2008 года (квадраты). Пунктирные линии показывают нижний предел для контроля за фертильностью и содержанием сперматозоидов. Размер выборки отличается от количества испытаний, потому что нет данных о женщинах, которые не откладывали яйца. (Бар в A относится к A и C ; в B относится к B и D. )
обсуждение
Предыдущие исследования показали, что атразин демаскулинизирует (химически кастрирует) и феминизирует личинок личинок земноводных, что приводит к гермафродитам ( 8 , 10 ) или самцам с яйцеклетками яичка ( 7 , 9 ) при метаморфозе.
Возможно, наиболее драматическим открытием здесь является то, что гермафродитизм, наблюдаемый при метаморфозе у животных, подвергшихся воздействию атразина ( 6 , 10 ), может в конечном итоге привести к полной феминизации. Полная феминизация самцов, подвергшихся воздействию атразина, согласуется с двумя предыдущими исследованиями, которые показали, что атразин феминизирует рыбок данио ( Danio rerio ) ( 5 ) и Xenopus laevis ( 39 ) ( рис. 6 ), и более недавним исследованием, которое показало, что воздействие атразина феминизирует леопардовые лягушки, рана пипиенс ( 40). Однако эти предыдущие отчеты основывались на изменениях в соотношении полов; наше исследование показало, что индуцированные атразином женщины действительно являются генетическими мужчинами. Кроме того, мы показали, что феминизация является постоянной и полной, в результате чего самки репродуктивной функции способны производить жизнеспособные яйца. Вместе имеющиеся данные и эти три аналогичных отчета ( 5 , 39 , 40 ) предполагают, что изменение пола с помощью атразина (полная феминизация генетических мужчин) является не видоспецифическим эффектом, а скорее эффектом, который наблюдается среди классов неамниотных позвоночных.
Рис. 6.
Другие исследования показали, что атразин изменяет соотношение полов. Данные Oka et al. ( 39 ) ( A ) и Suzawa и Ingraham ( 5 ) ( B ), показывающие зависимое от концентрации снижение у мужчин из-за воздействия атразина у африканских когтистых лягушек ( A ) и рыбок данио ( B ). Пунктирная линия показывает 50% отметку в обоих случаях.
В дополнение к феминизации, лица, подвергшиеся воздействию атразина, которые выглядели как мужчины, были демаскулинизированы в настоящем исследовании. Снижение уровня тестостерона у мужчин, подвергшихся воздействию атразина, также показано в предыдущих исследованиях ( 10).), согласуется со снижением всех тестостерон-зависимых морфологий, рассмотренных здесь, включая демаскулинизированную / феминизированную морфологию гортани и уменьшение размера размножающейся железы. Снижение уровня тестостерона и отсутствие повышенного уровня тестостерона у мужчин, подвергшихся воздействию атразина, в присутствии женщин также соответствует неспособности мужчин, подвергшихся воздействию атразина, конкурировать с неэкспонированными мужчинами за доступ к женщинам, и согласуется со снижением выработки сперматозоидов и серьезным нарушением фертильности.
Снижение частоты канальцев, содержащих зрелую сперму, позволяет предположить, что ранее сообщалось о снижении количества половых и кормящих клеток после воздействия атразина только в течение 48 ч у X. laevis ( 11).) сохраняется в зрелом возрасте. Аналогично, демаскулинизированные гортани предполагают, что меньший размер гортани, наблюдаемый при метаморфозе в предыдущих исследованиях ( 10 , 41 ), приводит к стойким эффектам в результате половой зрелости. Низкий коэффициент фертильности у мужчин, получавших атразин (независимо от содержания сперматозоидов), свидетельствует о том, что даже у мужчин с достаточным количеством сперматозоидов, подверженных атразину, не наблюдается копулятивного поведения, необходимого для успешного размножения.
Хотя атразин, как сообщается, воздействует на позвоночных через ряд механизмов, сообщаемый механизм, наиболее совместимый с эффектами, наблюдаемыми здесь, на размножение амфибий, - это индукция ароматазы, которая была показана в нескольких классах позвоночных ( 5 , 15 , 16 ). Индукция ароматазы согласуется с естественным процессом дифференцировки пола у X. laevis , в котором определяющий пол ген DM-W является транскрипционным фактором ( 44 ), который индуцирует экспрессию ароматазы в развивающейся недифференцированной гонаде генетического (ZW) женщины ( 44). Транскрипция и последующая трансляция ароматазы приводит к выработке эстрогена, что, в свою очередь, направляет дифференцировку яичника от недифференцированной гонады. Подобно тому, как экзогенный эстроген приводит к дифференцировке яичников у подверженных генетическому (ZZ) самцов X. laevis ( 45 ), индукция ароматазы и последующее производство эстрогена, вероятно, объясняют полную феминизацию генетического самца X. laevisатразином. Хотя в идеале необходимо доказать, что атразин индуцирует ароматазу у генетических мужчин до превращения в женщин, чтобы поддержать эту гипотезу, неясно, как такое исследование может быть проведено здесь. Животные, подвергнутые эвтаназии для измерения экспрессии ароматазы, не имеют возможности развиваться дальше, и, таким образом, невозможно доказать, что индивидуумам, которые выражали ароматазу, суждено было стать самками. Кроме того, почему только некоторые мужчины (10% в нынешней популяции) являются полностью феминизированными, в то время как их братья и сестры просто демаскулированы, еще предстоит выяснить.
Независимо от механизма воздействие атразина на амфибий и дикую природу в целом может иметь разрушительные последствия. Таким образом, уровень воздействия, рассматриваемый в настоящем исследовании, актуален даже для полуземных земноводных.
Хотя многие исследования были сосредоточены на смерти от болезней и ее роли в глобальном сокращении амфибий и внезапных загадочных исчезновениях популяций, практически не уделялось внимания медленной постепенной гибели популяций амфибий из-за неудачного пополнения ( 52).). Настоящее исследование предлагает несколько способов, которыми воздействие эндокринных разрушителей, таких как атразин, может привести к эффектам на уровне популяции в дикой природе и способствовать снижению численности амфибий. Конечно, неспособность конкурировать за женщин и значительное снижение рождаемости у подверженных мужчин, как сообщается в настоящем исследовании, будут иметь прямое влияние на уязвимые группы населения. Кроме того, мужчины с измененным полом (самки ZZ) способны производить только генетическое потомство самцов (ZZ), поэтому соотношение полов в незащищенных популяциях будет искажено как производством самок ZZ, индуцированных атразином, так и тем фактом, что ZZ Самки могут производить только потомство ZZ (генетически мужского пола). Фактически, математические модели предполагают, что этот самый механизм (производство обращенных с полом всех животных, производящих самцов) может привести к исчезновению популяций (53). Кроме того, неизвестно, является ли повышенная восприимчивость у самок ZZ наследственной, или же «резистентность», по-видимому, присутствующая у подверженных атразину самцов, которые не становятся самками, является наследственной. В любом случае, очевидно, что выбор на устойчивость или восприимчивость повлияет на популяционную генетику и, возможно, даже вызовет узкие места и потерю генетического разнообразия. Атразин, вероятно, влияет на популяции амфибий через любую комбинацию этих эффектов и, как таковой, является вероятным фактором глобального снижения численности амфибий. Похоже, что озабоченность Sanderson et al. [«Логическая проблема заключается в том, что триазиновые гербициды подвергаются воздействию дикой природы и человека, которые производятся и используются в больших количествах и являются повсеместными загрязнителями окружающей среды,15 )] может быть подтверждено.
Материалы и методы
Воздействие атразина.
Для методов относительно того, чтобы произвести половозрелых (F1) мужчин и личинок F2-ZZ, а также животноводство, см. SI Материалы и методы . Личинки ZZ (F2) выращивали в атразине (2,5 ppb, растворенного в этаноле) от вылупления, через метаморфоз [Nieuwkoop и Faber (NF) стадия 66] и в течение всей постметаморфической жизни для сравнения с контрольными (обработанными этанолом) животными. Общая концентрация этанола составила 0,003%. Уровни атразина и отсутствие атразина в контрольных резервуарах контролировали с помощью ELISA (Abraxis BioScience).
Морфометрический анализ (гортань, племенные железы и гонады) в период половой зрелости.
Эти анализы были проведены на половозрелых животных (через 2 или 3 года после метаморфоза, как указано). Для гортани была определена доля расширительных гортанов, которые простирались ниже тиоирала ( рис. 3 F - H ). Для брачных подушечек гистологические срезы (8 мкм) прорезали геометрический центр брачной накладки. Максимальную площадь поперечного сечения гнездных желез определяли и сравнивали с максимальной площадью поперечного сечения слизистых и серозных желез. Для яичка были проанализированы стадии сперматогенеза из пяти случайных канальцев яичка и из самого большого канальца из каждого поперечного сечения, а также доля семенников яичка из самых больших поперечных сечений с пучками сперматозоидов и без них. Для других измерений и проведенных исправлений см.СИ Материалы и методы .
Молекулярные маркеры для секса.
Геномную ДНК выделяли из кончиков пальцев ног, полученных путем лизиса ткани и переваривания протеиназы К. Генотип ZW определяли методом мультиплексной ПЦР-амплификации (37 циклов) DM-W (W-специфично) ( 44 ). Четыре животных, определенных как самки, на основе внешней морфологии были проанализированы для сравнения с четырьмя самцами. Условия и праймеры см. В разделе « Материалы и методы СИ» .
Анализ рождаемости.
Для изучения фертильности были проведены два исследования. В первом исследовании, проведенном 8 декабря 2007 года, девять контрольных и девять мужчин, получавших атразин (оба без инъекций ХГЧ), были в паре с исходными самками ZW (инъекция ХГЧ). Самки (из той же колонии Сан-Диего) были инъецированы и спарены с отдельными самцами в аквариумах (46 × 25 × 20 см) с 10 л свежего 10% -ного раствора Холтфретера и оставлены на ночь при 22 ° C. В 900 часов яйца были собраны. Яйца аэрировали и давали развиваться в течение 72 часов, после чего их фиксировали в фиксаторе Боуина в течение 48 часов и затем хранили в 70% этаноле (две смены в течение 48 часов). Плодородие определяли путем подсчета количества неразвитых яиц и количества развитых зародышей (стадии NF 14-34). Данные по фертильности (пропорции) были преобразованы в арксинус до ANOVA. К тому же,G тест. Все мужчины и женщины, использованные в этом исследовании, были девственницами и ранее не имели контакта с противоположным полом. Животные, использованные в этом исследовании, отличались от животных, использованных в вышеупомянутых исследованиях. Это исследование было повторено 12 декабря 2008 года с пятью контрольными и пятью подвергшимися воздействию атразина девами-самцами. В обоих случаях контрольные мужчины и мужчины, получавшие атразин, были протестированы в отдельных комнатах, так что вокализации из одной группы не влияли на результаты в другой. Животные в обоих этих исследованиях были одними и теми же, которые использовали для гистологического анализа и морфометрических исследований, описанных выше.
Авторы статьи: Тайрон Б. Хейс , Вики Хури , Энн Нарайан , Мариам Назир , Эндрю Парк , Трэвис Браун , Лилиан Адам , Элтон Чан , Даниэль Буххольц , Тереза Стуев и Шерри ГаллипоPNAS 9 марта 2010 г. 107 (10) 4612-4617; https://doi.org/10.1073/pnas.0909519107
Отредактировано * Дэвидом Б. Уэйком, Университет Калифорнии, Беркли, Калифорния, и утверждено 15 января 2010 г. (получено на рассмотрение 20 августа 2009 г.)
Читать статью полностью: https://www.pnas.org/content/107/10/4612.full?fbclid=IwAR2fcbRHEWYDyr68FNitNmuGhX8v61RD4kAWqTc_PXhc52jTWhmOMHgtl7s