Ещё немного о науке ненаучными словами. часть два. возвращение мутантов!
Итак, давайте порадуемся, тому что хоть некоторые из чашек у нас подали признаки жизни..
крупнее
Бывает и так
А бывает и вообще так!
Мы выбираем понравившиеся колонии (это та мелкая точка, и мы активно надеемся, что это именно наш искомый мутантик)
И тонкой иглой мы перекалываем помеченные колонии на новую чашку.
Я перекалываю не больше 50 штук.. ибо можно афигеть пока их проверишь..
Через пару суток, чашка выглядит вот так
И начинаем исследовать..
Каждую колонию переносим в стерильную пробирку со средой, и растим ещё сутки..
На след день, начинаем проверять..
Переливаем взвесь клеток в эппендорф (подписывая каждый.. и вот тут можно мозгом съехать, ибо если каждого вида у вас хоть по 10 штук - это уже аллес!)
Потом мы добавляем к клеткам мои любимые шаааарикиJ
И кучу ещё других реагентов, для того, чтобы клетки разрушились а их ДНК попало в раствор..
Добавляем фенол..
А он сцуко ванючий и даже вредный.. посему работаем в перчатках и под тягой..
И минут 10 мы зверски трясем вю эту смесь, чтоб ни одна клетка не осталась целой!
Получается вот такаЯ болтушка..
Суем в центрифугу и долго крутим, чтоб всё ненужное выпало в осадок
Добавляем ещё ведро реагентов.. и вот..
Над осадком по идее плавает ДНК, которую то нам и нада проверить на ту мутацию, которую мы хотели получить!
Мы берем этот раствор и ставим ПЦР.. (напоминаю.. это от двух до 4 часов)..
Каждую пробирочку опять подписать..
Аааа
Через 4 часа загоняем получившееся в гель..
И ставим форез..
И тут о чудо..
Можно увидеть получилось ли у нас вообще что-нибудь.
это свечение фрагментов ДНК меченых бромидом этидия в утрафиолетовом свете :)
Увидеть и зафиксировать это всё можно только при ультрафиолете, в темноте и только с помощью специальной камеры мы получаем вот такого плана картинку..
Мы долго и упорно начинаем рыться в программе, и пытаться вычислить, какой размер ( по линеечке слева) должен быть у нашего мутантика..
И вот может быть так..
А может и так
А может и вот так вот!!!
И вот, открою тайну..
Самая правая полосочка на последней картинке - это единственный мутантик на по моему 50 клонов от одной трансформации!!!!!
Но и это ещё не всё..
Геном то мы ему поменяли, а делает ли он то, что нам нужно (например какое-нибудь вещество) в нужном нам объеме, нам ещё предстоит проверить..
Кому интересно, могу написать следующую часть!