Сага о многоликом вирусе Эпштейна-Барр. Глава 1. Открытие вируса и последовавшие за ним сюрпризы
Вирус Эпштейна-Барр (ЭБВ)/Epstein-Barr Virus (EBV) чаще других упоминается в комментариях. К тому же так сложилась моя профессиональная судьбы, что в этой области я довольно много работал и был знаком с открывателем этого вируса, одним из корифеев онковирусологии Antony Epstein. Забавно, что мне, в то время юнцу, он предложил обращаться к нему Tony, чем я имел нахальство пользоваться. Профессор Эпштейн (таков устоявшийся перевод его имени на русский) жив, ему сейчас 101 год! А открытие, увековечившее его имя, он сделал в 1964г. В этом поучаствовала и его аспирантка Yvonne Barr. После защиты диссертации она ушла из науки, но её имя в науке осталось. Впрочем, ни у кого не возникало сомнения в том, это не тот случай, когда всё сделано аспирантом, а лавры достаются боссу, что нередко бывает…
Вообще-то, официальное название EBV - Human Herpesvirus type 4 (ННV-4)/вирус герпеса человека, тип 4 (ВГЧ-4). Но так его называют очень редко. Честно говоря, я и сам путаюсь в «пронумерованных» названиях вирусов герпеса человека (тех, которые 3, 4, 5). Далее буду пользоваться аббревиатурой EBV.
У открытия EBV была предыстория. Её главный и единственный герой - ирландский врач-хирург Денис Бёркитт (Denis Burkitt). После войны он осел в Уганде. Там он обнаружил у детей чрезвычайно агрессивную опухоль челюсти (на рисунке ниже далеко не самый тяжелый случай).
взято из Википедии
Сперва он посчитал опухоль саркомой, но затем стало ясно, что это лимфома с характерными патогистологическими особенностями. С тех пор данная опухоль называется лимфомой Бёркитта (Burkitt’s lymphoma). Случай был далеко не единичный. И доктор Бёркитт сделал то, на что не многие бы решились - на своём Лэнд Ровере от отправился колесить по деревням экваториальной Африки. Результатом этого многомесячного «сафари» стала карта распространения лимфома Бёркитта в Африке. Оказалось, что эта опухоль часто встречалась в довольно чётких географических границах - получивших название пояс Бёркитта. Интригующим было то, что пояс Бёркитта почти в точности совпадал с «малярийным поясом» Африки. В этой связи возник вопрос - а не вирус ли, передающийся комарами, является возбудителем лимфомы Бёркитта? В эти годы (начало 1960-х) охота на «вирусы рака» была в разгаре. Первым к финишу (как вскоре стало ясным, промежуточному) пришёл профессор Эпштейн с сотрудниками. Им удалось культивировать in vitro клетки африканской лимфомы Бёркитта и в этих клетках они обнаружили неизвестный ранее вирус герпеса. Этот вирус клетки не убивал и они размножались in vitro без признаков «старения». Всё это хорошо укладывалось в картину - EBV это онкогенный вирус, возбудитель лимфомы Бёркитта
Но далее начались сюрпризы. Оказалось, что антитела против наиболее иммуногенного антигена EBV (он называется VCA - viral capsid antigen) обнаружение которых эквивалентно установлению инфицированности этим вирусом, есть не только у всех больных африканской лимфомой Бёркитта, но и у подавляющего большинства взрослых людей. Метод определения анти-VCA разработали супруги Вернер и Гертруда Хенле (Werner & Gertrude Henle) (до войны они иммигрировали в США из Германии). Ключевым элементом этого метода были культуры клеток, продуцирующих EBV, которые им предоставил Эпштейн. То, что большинство людей инфицировано EBV разрушило гипотезу об «эксклюзивности» взаимоотношений в паре EBV- лимфома Бёркитта. Стало понятным, что EBV если и «запускает» развитие лимфомы Бёркитта, то не в одиночку. Так оно и оказалось, но об этом не сегодня.
Между тем последовал ещё один сюрприз. Усилиями супругов Хенле и их сотрудников было установлено, что EBV является возбудителем заболевания не имеющего отношения ни к лимфоме Бёркитта, ни к онкологии вообще - инфекционного мононуклеоза. Этому открытию помогла случайность. В любом тесте необходимы положительный и отрицательный контроли. В случае теста на анти-VCA это сыворотки крови заведомо положительные и отрицательные на данные антитела. С положительным контролем проблем не было - таких людей очень много. А вот анти-VCA отрицательных взрослых людей мало. В те времена, когда наука ещё не стала тем, какая она во многом сейчас (это отдельная тема, не буду углубляться), было нормальным в первую очередь поискать необходимый контроль внутри лаборатории. В лаборатории супругов Хенле анти-VCA-отрицательной была только одна молодая лаборантка. Сыворотку её крови и использовали как отрицательный контроль в тесте на анти-VCA. Однажды, эта лаборантка заболела. Диагноз - инфекционный мононуклеоз. Нужно сказать, что для университетской клиники в этом ничего необычного не было. В послевоенные годы частота инфекционного мононуклеоза в студенческой среде в США резко повысилась. Тогда к к этому заболеванию прилипло обиходное название «болезнь поцелуев» (kissing disease). Предполагалось, что заражение происходит через слюну, чему способствовала сексуальная революция, проходившая в то время. Но что же передаётся со слюной? Это оставалось загадкой.
И вот лаборантка выздоровела, её замороженная сыворотка закончилась, и кровь взяли вновь. Каково же было удивление супругов Хенле, которые лично просматривали препараты (использовали иммунофлуоресцентный тест), когда они увидели, что отрицательный контроль резко положителен. Перепроверили - всё подтвердилось. Дальнейшее было «делом техники» и, отчасти, везения. В одной из университетских клиник хранились замороженными сыворотки студентов, полученные перед поступлением. В коллекции хранились и сыворотки студентов, заболевших инфекционным мононуклеозом. Супруги Хенле получили несколько десятков таких «парных сывороток» (до болезни и после болезни). Во всех случаях, до болезни сыворотки были анти-VCA-отрицательны, а после болезни анти-VCA-положительны. Сомнений в том, что таинственные возбудитель инфекционного мононуклеоза это EBV почти не осталось.
Затем, также в лаборатории супругов Хенле, было установлено, что ЕBV если его добавить к лимфоцитам крови (которые in vitro быстро умирают), «трансформирует» последние - они приобретают способность размножатся in vitro неограниченно долго, что было названо «иммортализацией». С одной стороны, это дало возможность определять (титровать) EBV в различных биологических материалах. И оказалось, что в слюне его очень много, как и следовало ожидать для «kissing disease». C другой стороны, признаков наличия EBV в атипичных лимфоцитах, характерных для инфекционного мононуклеоза, не было. Да и иммортализация лучше вписывалась в картину лейкоза/лимфомыа, чем инфекционного мононуклеоза.
Думал, в традициях сериалов, на этом сегодняшний пост закончить. Но не буду сохранять эту интригу и конспективно изложу то, на что ушли многие годы.
ЕBV иммортализует не все лимфоциты, а только В-лимфоциты. И они действительно начинают размножаться. С этим связано появление необычных «гетерофильных» антител у больных EBV-инфекционным мононуклеозом, о которых было известно задолго до открытия EBV. К счастью, в подавляющем большинстве случаев, это размножения В-клеток берут под контроль T-лимфоциты (не чувствительные к EBV). Те самые «атипичные лимфоциты» в крови больных инфекционным мононуклеозом это именно Т-лимфоциты, борющиеся с «подстегиваемыми» EBV B-лимфоцитами.
Лучший тест для подтверждения диагноза EBV инфекционного мононуклеоза - это определение анти-VCA IgM. Если первичное инфицирование EBV происходит в раннем детстве, оно протекает незаметно. Вероятность развития инфекционного мононуклеоза резко возрастает, если первичное инфицирование EBV отсрочено до юности/молодости. Последнее имеет место, когда санитарно-гигиенические стандарты жизни высоки. Именно поэтому инфекционный мононуклеоз практически неизвестен в бедных странах. Никакой специфической терапии инфекционного мононуклеоза пока нет (хотя попытки лечить ацикловиром предпринимались). Но в целом содержание этой главы EBV саги понятно.
Сложнее с другими главами. И там не только о лимфоме Бёркитта… Но об этом уже не сегодня.
Проф_АФВ
P.S. Главы 2 и 3 здесь: https://prof-afv.livejournal.com/147479.html, https://prof-afv.livejournal.com/147879.html