Dadali_Research_TF_Advansed_Adaptogen_Antioxidant
Елена Янушкевич http://phytonet.mylivepage.ru
Dadali_Research_TF_Advansed_Adaptogen_Antioxidant
Сокращённый вариант отчёта. Смотреть полный вариант
Санкт-Петербургская Государственная Медицинская Академия
им. И. И. Мечникова
кафедра биологической химии с курсом биоорганической химии
ОТЧЕТ ПО ТЕМЕ:
«Исследование адаптогенных и антиоксидантных свойств Трансфер Фактора Эдвэнсд»
Санкт-Петербург
2009 г
РУКОВОДИТЕЛЬ РАБОТЫ:
зав. каф. биохимии, доктор химических наук, профессор Дадали В. А.
ИСПОЛНИТЕЛИ:
Павлова Р. Н. - кандидат медицинских наук, доцент;
Голованова Н. Э. - кандидат биологических наук, доцент;
Смертина М. Н. - кандидат биологических наук, доцент;
Кулеба В. А. - кандидат медицинских наук, доцент;
Агафонова О. А. - старший преподаватель кафедры биохимии;
Бейшебаева Ч. Р. - ассистент кафедры биохимии;
Махова Т. А. - старший научный сотрудник отделения биохимических исследований ЦНИЛ;
Мурзина А. А. - научный сотрудник отделения биохимических исследований ЦНИЛ;
Фаустова М. Е. - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник отделения биохимических исследований ЦНИЛ;
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ (теоретическое обоснование и предпосылки исследований)
Успехи цивилизации, научно-технический прогресс, достижения медицины, к сожалению, не привели к снижению инфекционных и неинфекционных болезней среди населения планеты. Напротив, растет число онкологических, сердечнососудистых, респираторных, эндокринных заболеваний, нервно-психических расстройств. Одной из причин такого положения является снижение коллективной резистентности населения планеты в результате глобального неблагоприятного воздействия на организм человека социальных (недостаточное и неполноценное питание), экологических (загрязнение атмосферы и окружающей среды техногенными факторами), медицинских (неоправданное применение некоторых лекарственных средств, наркотиков, алкоголя, стресс и др.) факторов.
Все эти причины отрицательно влияют на иммунную систему, вызывают иммунодефициты.
Одним из основных способов поддержания нормального функционирования иммунной системы и восстановления иммунитета при иммунодефицитных состояниях является применение иммуномодуляторов. К иммуномодуляторам относятся природные и синтетические вещества, способные оказывать нормализующее действие на иммунную систему.
Наиболее приемлемыми и адекватными для организма человека являются естественные, так называемые, эндогенные иммуномодуляторы, основу которых составляют вещества, принимающие участие в регуляции иммунных процессов в организме человека и животных.
К таким иммуномодуляторам относится Трансфер Фактор (ТФ), представляющий собой концентрат природных пептидов [1], выделенных впервые из лимфоцитов, а затем из молозива животных и человека, а также специально подготовленных куриных яиц.
ТФ уже многие годы успешно используются для лечения и профилактики бактериальных, вирусных, грибковых инфекций, паразитарных болезней, злокачественных опухолей, аутоиммунных, аллергических и эндокринных расстройств; первичных и вторичных иммунодефицитов; при болезнях, сопровождающихся нарушениями функций иммунной системы [2].
По сведениям C.H. Kirkpatrick. и соавторов, ТФ, относящиеся к цитокинам, представляют собой пептиды, состоящие в среднем из 44 аминокислот. Следовательно, их молекулы имеют достаточно малый размер и низкую молекулярную массу - от 3500 до 10 000 дальтонов. По данным некоторых авторов эти границы сужены между 3500 и 5000 дальтонов [3].
ТФ не являются видоспецифическими и обладают универсальной эффективностью, независимо от биологического вида донора и реципиента. Следовательно, они могут с успехом использоваться у человека и различных млекопитающих, так как могут передавать иммунитет людям даже в том случае, если их источником является другой вид млекопитающего. Это и позволило использовать в качестве источника ТФ молозиво коров и желтки куриных яиц.
Существующие ТФ подразделяются на три основные фракции, названные в соответствии с их основным действием на иммунную систему: индукторы, антиген-специфичные ТФ и супрессоры [2]. Индукторы обеспечивают общую готовность иммунной системы. Антиген-специфичные ТФ представляют собой набор определенных антигенов, с помощью которых иммунная система может заранее научиться распознавать различные микроорганизмы, вирусы и т. д. Супрессоры не позволяют иммунной системе сосредотачивать всю свою силу на уже побежденной инфекции, игнорируя при этом другие угрозы. Кроме того супрессоры регулируют интенсивность иммунного ответа и тем самым предотвращают аутоиммунные реакции.
В отличие от антител, которые имеют большую молекулярную массу, молекулы ТФ имеют достаточно малый размер. Именно этим объясняется тот факт, что ТФ не имеют аллергенных свойств. При этом если антитела реализуют свое действие, присоединяясь к чужеродным белкам (антигенам), то ТФ действуют иначе. Они представляют собой сигнальные молекулы, которые «обучают» и «тренируют» незрелые иммунные клетки, подготавливая их к отражению угрозы.
ТФ являются молекулами иммунной памяти. Часть маленькой молекулы ТФ кодирует антигенную структуру организмов, воспринимаемых иммунной системой в качестве угрозы. Определенная последовательность аминокислот дает информацию о распознавании или запоминании этой угрозы с тем, чтобы в соответствии с этим запрограммировать нейтральные Т-лимфоциты. Этот набор Т-клеток увеличивается и включает цитотоксический лимфоцит (CTL), клетки Т-хелперы (ТН0, ТН1, ТН2), природные клетки-киллеры (НК-клетки) и Т-регуляторные клетки. Молекула ТФ располагается на верхушке «Н» подобного рецептора Главного комплекса гистосовместимости (или МНС). После этого соединение ТФ и МНС превращается в уникальную антиген-специфичную зону распознавания, готовую к контакту со своей реципрокной структурой в среде патогенных угроз.
Очевидно, что ТФ сами по себе не оказывают непосредственного воздействия на стимуляцию иммунитета. Скорее всего, в результате воздействия ТФ на иммунные клетки высвобождаются такие медиаторы как интерлейкины. Антигенпрезентирующая клетка должна обработать антигенные структуры микроба и выработать соответствующий пептид, в частности, ТФ. Затем антиген презентируется нейтральной Т-клетке любого типа или класса CD. Данный процесс представляет собой одно из звеньев общей цепи. Вначале МНС должен принять ТФ. Затем по сигналу Т-клетка экспрессирует рецепторы интерлейкина-2 (IL-2) и вырабатывается сам IL-2. Благодаря положительной обратной связи, Т-клетка становится очень активной. Во время презентации антигена дополнительно образуются другие цитокины. Эти процессы происходят в лимфоидной ткани, где в большом количестве присутствуют NK-клетки и другие Т-клетки. Таким образом, окружающие клетки также активизируются, и в них увеличивается количество как IL-2, так и других интерлейкинов. Имеются данные о том, что хотя NK-клетки и содержат рецепторы для ТФ, они используют их не в целях распознавания, а скорее в целях управления ранней иммунной реакцией. Таким образом, усилительную функцию следует рассматривать, вероятно, как результат процесса обучения, осуществляемого ТФ.
Отмечено, что антиген-презентирующий компонент ТФ значительно снижает период выработки антител, ускоряя представление антигенов иммунокомпетентным клеткам. Не менее важным аспектом влияния этого компонента ТФ является неспецифическая активация макрофагальных реакций, способствующая завершенному фагоцитозу, распознаванию любых антигенов макрофагами и их презентации другим иммунокомпетентным клеткам. Было установлено, что ТФ значительно активнее, чем широко известные иммуномодуляторы (эхинацея, алоэ и т. д.). ТФ усиливает активность НК на 103 %, ТФ Плюс, отличающийся добавлением природных растительных иммуномодуляторов и адаптогенов, на 243 %, ТФ Эдвенсд - 283 %, тогда как эхинацея - на 43 %, алоэ - на 15 % [2].
Обобщение широкого круга иммунологических исследований ТФ позволяет придти к заключению, что он оказывает следующие виды действия на иммунную систему [4]:
• Регулирует клеточное и гуморальное звено иммунной системы, в частности, повышает активность естественных лимфоцитов-киллеров, которые стимулируют выработку иммуноцитокинов;
• Является иммунорегулятором про- и контрвоспалительных цитокинов;
• Стимулирует Т-клеточный иммунитет, восстанавливает соотношение Т-хелперы/Т-супрессоры, повышает цитотоксичность лимфоцитов;
• Увеличивает цитотоксический потенциал НК-клеток;
• Вызывает образование в организме эндогенных интерферонов. Восстанавливает активность клеток-интерферонпродуцентов;
• Вызывает неспецифическую активацию макрофагов;
• Способствует завершенному фагоцитозу;
• Способствует распознаванию антигенов макрофагами;
• Ускоряет этап презентации антигенов иммунокомпетентным клеткам;
• Сокращает время выработки антител;
• Усиливает местный иммунитет за счет снижения свободнорадикального окисления липидов и повышения стабильности цитомембран, что оказывает протекторное действие на эпителиальный покров слизистых, увеличивая конкурентную адгезию на них полезной микрофлоры;
• Способствует быстрой элиминации вирусов;
• Уменьшает иммунодепрессию, вызванную ксенобиотиками, лекарствами и канцерогенами;
• Резко сокращает частоту обострений при хронических заболеваниях, улучшает качество жизни больных;
• Повышает эффективность антибактериальных и антивирусных лекарств, хорошо совместим со всеми средствами традиционного лечения различных заболеваний, нередко уменьшая потребность в них;
• Совместим с химио- и лучевой терапией онкобольных, снижает их побочные, токсические осложнения; повышает иммунитет.
• Не вызывает аллергии, не имеет побочных эффектов, не имеет противопоказаний.
Первые препараты ТФ были выделены из крови. Для приготовления препаратов ТФ используется донорская кровь или кровь из специальных банков крови, срок хранения которой уже истек. Однако использование крови человека в качестве источника ТФ имеет много негативных моментов. В качестве альтернативного источника получения ТФ могут использоваться животные материалы, такие как кровь, селезенка и лимфатические узлы. Существует также метод получения ТФ из лейкоцитов крови. В практическом отношении более важным и более широко используемым источником ТФ является молозиво. Для промышленного получения ТФ чаще всего используется молозиво, получаемое от дойных домашних животных [2].
Первоначально препараты ТФ назначались исключительно инъекционным путем, однако, дальнейшие исследования показали, что ТФ не расщепляется в ЖКТ и сохраняет свою эффективность при пероральном применении.
Компания «4-Life research», США представила на российский рынок несколько трансфер-содержащих продуктов:
1. "Трансфер фактор-тм" классический - концентрат ТФ из молозива коров.
2. "Трансфер фактор Эдвенсд" - смесь ТФ из молозива и желтков яиц.
3. "Трансфер фактор плюс" - сочетание с растительными иммуномодуляторами (грибами кордицепс, шиитаке, маитаке, агарикус, овсом, алое, листом оливы и др.).
4. "Трансфер фактор кардио" - сочетание специфического для сердечной мышцы ТФ с витаминами, минералами и растениями-кардиопротекторами для поддержки здоровья сердечно-сосудистой системы.
5. "Трансфер Фактор Глюкоуч" - для поддержания функционирования инсулинозависимых систем организма.
В новом продукте Трансфер Фактор Эдвенсд используется Трансфер Фактор Е-XF - фирменный патентованный концентрат ТФ из молозива коров и желтка куриных яиц.
Особенность ТФ Эдвенсд заключается в том, что он содержит антиген-специфичную фракцию, которая успешно ликвидирует воспалительный процесс в сосудистой стенке даже на самых ранних стадиях воспаления.
Экспериментальные исследования, проведенные в Онкологическом Центре им. Блохина РАМН, показали, что ТФ Эдвэнсд повышает активность естественных клеток-киллеров на 283%.
Иммуномодуляция является одним из важнейших механизмов адаптационных процессов организма и может быть отнесена к механизмам специфической адаптации. Однако физиологически адаптация - значительно более широкое понятие и включает многоплановые неспецифические механизмы.
Особую актуальность и фактически жизненную необходимость приобретает проблема повышения устойчивости организма и мобилизация его резервных возможностей, а, следовательно, направленный поиск эффективных и безопасных адаптогенов. Два обстоятельства делают эту проблему исключительно важной для современной медицины. Во-первых, необходимость адаптации больших контингентов людей к высоким нервно-эмоциональным нагрузкам, действию техногенных ксенобиотиков, электромагнитных полей, последствиям гиподинамии и нерационального питания; во-вторых, профилактика и лечение неинфекционных заболеваний (онкологических, сердечно-сосудистых, обмена веществ) [5].
Дизадаптация всегда носит многоплановый характер и затрагивает одновременно многие разбалансированные звенья адаптивного ответа. В основе дизадаптации и патогенетических механизмов практически любой патологии лежит нарушение состояния и функций биомембран, состояния иммунной системы, ферментативного и неферментативного звеньев антиоксидантной системы, функционирование детоксикационных систем - ферментов семейства монооксигеназ и системы конъюгации. Становится очевидным, что повышение функционирования адаптивных механизмов возможно лишь при одновременном балансирующем воздействии на все основные звенья.
В настоящее время существует значительное количество средств, способных стимулировать защитные силы организма и тем самым повышать его работоспособность и сопротивляемость внешним факторам. Этот эффект 8
может достигаться с помощью как стимуляторов-допингов, так и стимулирующих средств - адаптогенов. Действие этих двух групп веществ на процессы клеточного метаболизма существенно различается. Эффект стимуляторов-допингов реализуется посредством возбуждения определенных структур центральной нервной системы, которые, в свою очередь, активизируют метаболические процессы, протекающие в различных органах и тканях. Действие их проявляется быстро, но оно непродолжительно. Поскольку данная форма стимуляции сопровождается истощением, она не может быть физиологической. Иная картина характерна для использования адаптогенных средств. В этом случае анаболические процессы, суть которых заключается в синтезе структурных веществ и богатых энергией соединений, превалируют над процессами катаболизма. В результате происходит физиологическая гармоничная мобилизация всех защитных сил. Эти вещества, расширяя узкие места метаболизма, предупреждают нарушение энергетических и пластических процессов в тканях. Они способны длительное время поддерживать в экстремальных условиях постоянство внутренней среды. Способность таких веществ активизировать защитные силы организма и тем самым повышать его резистентность к экстремальным агентам, дало основание выделить их в особую группу - адаптогены.
Анализируя данные об адаптогенах, можно считать, что на организменном уровне они действуют следующим образом [6]:
- тонизируют центральную нервную систему, улучшают процессы обучения, памяти, условнорефлексивную деятельность, повышают умственную работоспособность, улучшают синаптическую передачу в симпатических и парасимпатических волокнах периферической нервной системы;
- нормализуют функцию эндокринной системы организма (регуляция анаболических и катаболических процессов);
- контролируют процесс образования и расхода энергии в исполнительных клетках (мышц, печени, почек, мозга и других органов);
- восстанавливают иммуносупрессивный эффект как следствие тренировочного и соревновательного процессов, влияя на гуморальный и клеточный иммунитет;
- способствуют антиоксидантному действию в организме, предотвращая токсические процессы свободнорадикального окисления ненасыщенных жирных кислот, которые активируются при истощающей физической нагрузке;
- предотвращают гипоксию;
- обладают анаболизирующими эффектами, которые необходимо поддерживать при истощении организма, интенсивной физической работе и т. д.;
- улучшают микроциркуляцию головного мозга и работающих мышц за счет улучшения реологических свойств крови.
Как следует из основных положений теории адаптации, необходимым условием снижения риска развития патологических состояний при воздействии на организм неблагоприятных факторов является адекватность мобилизации его адаптивных механизмов. Динамическое понятие адаптации отражает процесс приспособления организма к меняющимся условиям внешней среды, обеспечивающий устойчивое существование и нормальную жизнедеятельность. С позиции физиологии человека, адаптация обозначает совокупность физиологических реакций, обеспечивающих приспособление строения и функций организма или его органов к изменению окружающей среды. Суть физиологической адаптации - в способности организма сохранить жизненно важные параметры гомеостаза, обеспечивающие его благоприятное существование в условиях стрессовых воздействий [5].
Наступление состояния адаптации характеризуется морфологическими, физиологическими и биохимическими сдвигами, возникающими на разных уровнях биологической системы (от организменного до молекулярного), и имеет в своей основе метаболическую адаптацию, то есть количественные изменения уровня обменных и энергопродуцирующих процессов [7].
На уровне целостного организма эти изменения носят системный характер и контролируются регуляторными механизмами центральной нервной системы (ЦНС) и эндокринной системы.
На клеточном уровне адаптация характеризуется соответствующими изменениями чувствительности клеточных рецепторов различных типов и соответствующих исполнительных механизмов к действию как гормонов и нейротрансмитеров, так и экзогенных биологически активных веществ.
Важными интегральными механизмами адаптации на молекулярном и клеточном уровнях являются [5]:
1. изменение состояния мембранного аппарата клетки, микровязкости липидного бислоя, селективной проницаемости,
2. состояние и активность рецепторов и ионных каналов,
3. состояние мембранных ферментных систем; в первую очередь тесно связанных и взаимодействующих между собой полифункциональных блоков, выполняющих функцию защиты организма от повреждающих факторов на всех уровнях:
• система антирадикальной и антиперекисной защиты, контролирующая уровень свободнорадикальных и перекисных процессов на клеточном, тканевом и органном уровнях;
• система микросомальных монооксигеназ как первая фаза детоксикации ксенобиотиков, которая представляет собой электронотранспортную цепь, организованную в белково-липидный комплекс, катализирующую реакцию включения атома кислорода в молекулу гидрофобных соединений. Центральным компонентом этой системы является цитохром Р-450. Метаболизированные на этой стадии гидрофобные соединения вступают во вторую, завершающую стадию детоксикации - реакции конъюгации.
клинических исследованиях ТФ-базового, проведенных в СПбГМА им. И. И. Мечникова при совместной работе кафедры биохимии, биохимического отдела ЦНИЛа и кафедры травматологии, на больных различными формами остеомиелита было показано, что ТФ, являясь иммуномодулятором, одновременно оказывал влияние на биохимические механизмы неспецифической резистентности, включая систему свободнорадикального окисления, повышал устойчивость клеточных мембран, активность антиоксидантной защиты [25]. Это позволило сформулировать представление о том, что ТФ является не только иммуномодулятором, но и обладает более широким спектром биологической активности, включая влияние на антиоксидантную систему организма, функции мембранного аппарата клетки и его адаптивные возможности. Впервые установленные и ранее не известные свойства ТФ требовали дополнительной проверки в эксперименте, который, как известно, позволяет в более стандартных условиях провести исследования указанных свойств. Такой подход является необходимым, поскольку клинические данные получены при массе неконтролируемых параметров, включая болевой стресс, характер питания, прием многочисленных лекарственных препаратов, курение, возможный прием алкоголя и т. д.
Целью данной работы и стало изучение антиоксидантных и адаптивных свойств ТФ (на примере ТФ Эдвенсд) в эксперименте.
ВЫВОДЫ
1. Проведенное исследование влияния ТФ на физическую выносливость крыс показало наличие у ТФ актопротекторного действия, которое проявлялось при приёме ТФ в течение не менее 15 дней.
2. В опытах in vivo показано влияние ТФ на активность ферментов антиоксидантной системы, а также на тиол-дисульфидную систему, приводящее к повышению восстановленных эквивалентов в клетке и, как следствие, снижению интенсивности ПОЛ.
3. По результатам опытов in vivo можно предположить наличие корригирующих эффектов ТФ, выражающиеся в нормализации активности СОД, каталазы, ГSТ, ГПО и Г-6-ФДГ при изменении их активности (повышении или понижении).
4. В опытах in vitro показано влияние ТФ на активность ферментов антиоксидантной системы, проявляющееся в снижении их активности, вероятно, за счет ТФ-белковых взаимодействий между ферментами и ТФ, приводящее к конформационным перестройкам в молекулах ферментов.
5. В опытах in vitro на основании данных по соотношению SH/SS групп в белковой и низкомолекулярной фракциях и уровню ПОЛ в плазме крови, показано, что ТФ оказывает антиоксидантный эффект только при повышенной перекисной нагрузке, т. е. в условиях оксидативного стресса.
6. Учитывая актопротекторный эффект ТФ, выражающийся в повышении физической выносливости животных, нормализующем влиянии ТФ на активность ферментов антиоксидантной системы и тиол-дисульфидную систему, а также выраженное антиоксидантное действие ТФ in vivo и in vitro в условиях оксидативного стресса, можно заключить, что ТФ может быть квалифицирован как адаптогенный и антиоксидантный продукт.
ЛИТЕРАТУРА
1. Lawerence H.S. The cellular transfer of cutaneous hypersensitivity to tuberculin in man//Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1949, 71, p. 516.
2. У. Дж. Хеннен. Трансфер Фактор-Плюс: Идеальная комбинация биологически активных веществ для оптимального иммунитета. Под редакцией Ю.П. Гичева и Э. Огановой. - Новосибирск. - 2001. - 73 с.
3. Методические рекомендации министерства Здравоохранения и Социального развития РФ «Иммунореабилитация инфекционно-воспалительных и соматических заболеваний с использованием Трансфер Фактора». - Москва. - 2004.
4. Халтурина Е. Трансфер Фактор - новое поколение иммуномодуляторов и адаптогенов//12 Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». - 2005.
5. Шабров А.В., Дадали В.А., Макаров В.Г. «Биохимические основы действия микрокомпонентов пищи». Под редакцией проф. Дадали В.А. - М.: Авваллон. - 2003. - с. 184.
6. Погорелый В.Е., Слюньковая Н.Е., Макарова Л.М., Слюньковая Т.Е. Адаптогены: прошлое, настоящее, будущее//7-й международный съезд Фитофарм 2003 «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (материалы съезда). - СПб, Пушкин. - 2003. - с. 250-257.
7. Эликсиры//Под редакцией Макарова В.Г. - СПб.: Межрегиональный центр «Адаптоген». - 1999. - с. 218.
8. Меньщикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К., Бондарь И.А., Круговых Н.Ф., Труфакин В.А. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. - М.: «Слово», 2006. - с. 576.
9. Munday R., Winterboume C.C. Reduced glutathione in combination with superoxide dismutase as an important biological antioxidant defense mechanism//Biochem. Pharmacol. - 1989. - Vol. 38. - p. 4349-4352.
10. Liochev S.I.., Fridovich I. Copper. Zinc superoxide dismutase as a univalent NO-oxidoreductase and as a dichlorofluorescin peroxidase//J. Biol. Chem. - 2001. - Vol. 276. - p. 35253-35257.
11. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. - Л.: Наука, 1985.
12. Шинкаренко Н.В., Алексовский В.Б. Химические свойства синглетного молекулярного кислорода и значение его в биологических системах.//Успехи химии. -1982. - Т. 51, № 5. - с. 713-735.
13. Kirkman H.N., Rolfo M., Ferraris A.M., Gaetani G.F. Mechanisms of protection of catalase by NADPH. Kinetics and stoichiometry//J. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274. - p. 13908-13914.
14. Ларский Э.Г. Методы определения и метаболизм металлобелковых комплексов.//Итоги науки и техники. Сер. Биологическая химия. - 1990. - Т. 41.
15. Hansen J.C., Pedersen H.S., Mulvad G. Fatty acids and antioxidants in the inuit diet. Their role in ischemic heat disease (IHD) and possible interactions with other dietary factors. A review//Arctic Med. Res. - 1984. - Vol. 53. - p. 4-17.
53
16. Link E.M. Enzymic pathways involved in cell response to H2O2//Free Radic. Res. Commun. - 1990. - Vol. 11. - p. 89-97.
17. Lands W.M. Biochemistry of arachidonic acid metabolism. Boston: Nijhoff. - 1985.
18. Meneghini R., Benfato M.S., Bertoncini C.R. et al. Iron homeostasis and oxidative DNA damage//Cancer J. - 1995. - Vol. 8. - p. 109-113.
19. Hayes J.D., Flanagan J.U., Jowsey I.R. Glutathione transferases//Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. - 2005. - Vol. 45. - p. 51-88.
20. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И. Глутатионтрансферазы//Успехи соврем. биологии. - 1989. - Т. 107, вып. 2. - с. 179-194.
21. Бондарь Т.Н., Ланкин В.З., Антоновский В.Л. Восстановление органических гидроперекисей глутатионпероксидазой и глутатион-S-трансферазой: влияние структуры субстрата. Докл. АН СССР. - 1989. - Т. 304, № 1. - с. 217-220.
22. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона//Успехи соврем. биологии. - 1990. - Т. 110, вып. 1. - с. 20-33.
23. Соколовский В.В. Тиолдисульфидное соотношение крови как показатель состояния неспецифической резистентности организма. - СПб., 1996. - с. 30.
24. Справочник: медицинские лабораторные технологии//Под редакцией Карпищенко А.И. - СПб.: «Интермедика». - 1999. - Т. 2. - с. 24-27.
25. Дадали В.А., Рак А.В., Столпник Е.С., Кельвин В. МакКослан, Оганова Э.А. Применение Трансфер Фактора в лечение больных остеомиелитом//Вестник Санкт-Петербургской государственной академии им. И. И. Мечникова. - 2002. - № 3-4.
26. Harbig W.H., Pabst J., Jakoby W.B. Glutathione-S-transferases: the first enzymatic step in mercapturic acid formation.//J. Biol. Chem.- 1974. - Vol. 249, № 22. - p. 7130-7139.
27. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н., под ред Хавинсона В.Х. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма. - СПб., 2000.
28. Lowry O. et al. Protein measurement with folin phenol reagent.//J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193. - p. 265-275.
29. Коробейникова Э.Н. Модификация определения продуктов перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой//Лабораторное дело. - 1989. - № 7- с.8-9.
30. Леонова В.Г. Анализ эритроцитарных популяций в онтогенезе человека. Новосибирск: «Наука», 1987. - с. 240.
31. Бойко Е.Р., Щадрина В.Д., Козловская А.В. Сезонные аспекты функционирования ферментативных антиоксидантных систем рожениц европейского севера.//Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2006. - М., 1992, №5, с. 633-642.
32. Соколовский В. В. Тиолдисульфидная система в реакции организма на факторы окружающей среды. - СПб., 2008. - с. 76.
33. Masaki H., Okano Y., Sakurai H. Differential role of catalase and glutathione peroxidase in cultured human fibroblasts under exposure of H2O2 or ultraviolet B light//Arch Dermatol. Res. - 1998. - Vol. 290. - p. 113-118.
34. Eaton J.W. Catalases and peroxidases and glutathione and hydrogen peroxide: Mysteries of the bestiary.//J. Lab. Clin. Med. - 1991. - Vol. 118. - p. 3-4.
35. Scott M.D., Lubin B.H., Zuo L., Kuypers F.A. Erythrocyte defense against hydrogen peroxide: Preeminent importance of catalase//J. Lab. Clin. Med. - 1991. -Vol. 118. - p. 7-16.
http://phytonet.mylivepage.ru/wiki/1299/817
Dadali_Research_TF_Advansed_Adaptogen_Antioxidant
Сокращённый вариант отчёта. Смотреть полный вариант
Санкт-Петербургская Государственная Медицинская Академия
им. И. И. Мечникова
кафедра биологической химии с курсом биоорганической химии
ОТЧЕТ ПО ТЕМЕ:
«Исследование адаптогенных и антиоксидантных свойств Трансфер Фактора Эдвэнсд»
Санкт-Петербург
2009 г
РУКОВОДИТЕЛЬ РАБОТЫ:
зав. каф. биохимии, доктор химических наук, профессор Дадали В. А.
ИСПОЛНИТЕЛИ:
Павлова Р. Н. - кандидат медицинских наук, доцент;
Голованова Н. Э. - кандидат биологических наук, доцент;
Смертина М. Н. - кандидат биологических наук, доцент;
Кулеба В. А. - кандидат медицинских наук, доцент;
Агафонова О. А. - старший преподаватель кафедры биохимии;
Бейшебаева Ч. Р. - ассистент кафедры биохимии;
Махова Т. А. - старший научный сотрудник отделения биохимических исследований ЦНИЛ;
Мурзина А. А. - научный сотрудник отделения биохимических исследований ЦНИЛ;
Фаустова М. Е. - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник отделения биохимических исследований ЦНИЛ;
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ (теоретическое обоснование и предпосылки исследований)
Успехи цивилизации, научно-технический прогресс, достижения медицины, к сожалению, не привели к снижению инфекционных и неинфекционных болезней среди населения планеты. Напротив, растет число онкологических, сердечнососудистых, респираторных, эндокринных заболеваний, нервно-психических расстройств. Одной из причин такого положения является снижение коллективной резистентности населения планеты в результате глобального неблагоприятного воздействия на организм человека социальных (недостаточное и неполноценное питание), экологических (загрязнение атмосферы и окружающей среды техногенными факторами), медицинских (неоправданное применение некоторых лекарственных средств, наркотиков, алкоголя, стресс и др.) факторов.
Все эти причины отрицательно влияют на иммунную систему, вызывают иммунодефициты.
Одним из основных способов поддержания нормального функционирования иммунной системы и восстановления иммунитета при иммунодефицитных состояниях является применение иммуномодуляторов. К иммуномодуляторам относятся природные и синтетические вещества, способные оказывать нормализующее действие на иммунную систему.
Наиболее приемлемыми и адекватными для организма человека являются естественные, так называемые, эндогенные иммуномодуляторы, основу которых составляют вещества, принимающие участие в регуляции иммунных процессов в организме человека и животных.
К таким иммуномодуляторам относится Трансфер Фактор (ТФ), представляющий собой концентрат природных пептидов [1], выделенных впервые из лимфоцитов, а затем из молозива животных и человека, а также специально подготовленных куриных яиц.
ТФ уже многие годы успешно используются для лечения и профилактики бактериальных, вирусных, грибковых инфекций, паразитарных болезней, злокачественных опухолей, аутоиммунных, аллергических и эндокринных расстройств; первичных и вторичных иммунодефицитов; при болезнях, сопровождающихся нарушениями функций иммунной системы [2].
По сведениям C.H. Kirkpatrick. и соавторов, ТФ, относящиеся к цитокинам, представляют собой пептиды, состоящие в среднем из 44 аминокислот. Следовательно, их молекулы имеют достаточно малый размер и низкую молекулярную массу - от 3500 до 10 000 дальтонов. По данным некоторых авторов эти границы сужены между 3500 и 5000 дальтонов [3].
ТФ не являются видоспецифическими и обладают универсальной эффективностью, независимо от биологического вида донора и реципиента. Следовательно, они могут с успехом использоваться у человека и различных млекопитающих, так как могут передавать иммунитет людям даже в том случае, если их источником является другой вид млекопитающего. Это и позволило использовать в качестве источника ТФ молозиво коров и желтки куриных яиц.
Существующие ТФ подразделяются на три основные фракции, названные в соответствии с их основным действием на иммунную систему: индукторы, антиген-специфичные ТФ и супрессоры [2]. Индукторы обеспечивают общую готовность иммунной системы. Антиген-специфичные ТФ представляют собой набор определенных антигенов, с помощью которых иммунная система может заранее научиться распознавать различные микроорганизмы, вирусы и т. д. Супрессоры не позволяют иммунной системе сосредотачивать всю свою силу на уже побежденной инфекции, игнорируя при этом другие угрозы. Кроме того супрессоры регулируют интенсивность иммунного ответа и тем самым предотвращают аутоиммунные реакции.
В отличие от антител, которые имеют большую молекулярную массу, молекулы ТФ имеют достаточно малый размер. Именно этим объясняется тот факт, что ТФ не имеют аллергенных свойств. При этом если антитела реализуют свое действие, присоединяясь к чужеродным белкам (антигенам), то ТФ действуют иначе. Они представляют собой сигнальные молекулы, которые «обучают» и «тренируют» незрелые иммунные клетки, подготавливая их к отражению угрозы.
ТФ являются молекулами иммунной памяти. Часть маленькой молекулы ТФ кодирует антигенную структуру организмов, воспринимаемых иммунной системой в качестве угрозы. Определенная последовательность аминокислот дает информацию о распознавании или запоминании этой угрозы с тем, чтобы в соответствии с этим запрограммировать нейтральные Т-лимфоциты. Этот набор Т-клеток увеличивается и включает цитотоксический лимфоцит (CTL), клетки Т-хелперы (ТН0, ТН1, ТН2), природные клетки-киллеры (НК-клетки) и Т-регуляторные клетки. Молекула ТФ располагается на верхушке «Н» подобного рецептора Главного комплекса гистосовместимости (или МНС). После этого соединение ТФ и МНС превращается в уникальную антиген-специфичную зону распознавания, готовую к контакту со своей реципрокной структурой в среде патогенных угроз.
Очевидно, что ТФ сами по себе не оказывают непосредственного воздействия на стимуляцию иммунитета. Скорее всего, в результате воздействия ТФ на иммунные клетки высвобождаются такие медиаторы как интерлейкины. Антигенпрезентирующая клетка должна обработать антигенные структуры микроба и выработать соответствующий пептид, в частности, ТФ. Затем антиген презентируется нейтральной Т-клетке любого типа или класса CD. Данный процесс представляет собой одно из звеньев общей цепи. Вначале МНС должен принять ТФ. Затем по сигналу Т-клетка экспрессирует рецепторы интерлейкина-2 (IL-2) и вырабатывается сам IL-2. Благодаря положительной обратной связи, Т-клетка становится очень активной. Во время презентации антигена дополнительно образуются другие цитокины. Эти процессы происходят в лимфоидной ткани, где в большом количестве присутствуют NK-клетки и другие Т-клетки. Таким образом, окружающие клетки также активизируются, и в них увеличивается количество как IL-2, так и других интерлейкинов. Имеются данные о том, что хотя NK-клетки и содержат рецепторы для ТФ, они используют их не в целях распознавания, а скорее в целях управления ранней иммунной реакцией. Таким образом, усилительную функцию следует рассматривать, вероятно, как результат процесса обучения, осуществляемого ТФ.
Отмечено, что антиген-презентирующий компонент ТФ значительно снижает период выработки антител, ускоряя представление антигенов иммунокомпетентным клеткам. Не менее важным аспектом влияния этого компонента ТФ является неспецифическая активация макрофагальных реакций, способствующая завершенному фагоцитозу, распознаванию любых антигенов макрофагами и их презентации другим иммунокомпетентным клеткам. Было установлено, что ТФ значительно активнее, чем широко известные иммуномодуляторы (эхинацея, алоэ и т. д.). ТФ усиливает активность НК на 103 %, ТФ Плюс, отличающийся добавлением природных растительных иммуномодуляторов и адаптогенов, на 243 %, ТФ Эдвенсд - 283 %, тогда как эхинацея - на 43 %, алоэ - на 15 % [2].
Обобщение широкого круга иммунологических исследований ТФ позволяет придти к заключению, что он оказывает следующие виды действия на иммунную систему [4]:
• Регулирует клеточное и гуморальное звено иммунной системы, в частности, повышает активность естественных лимфоцитов-киллеров, которые стимулируют выработку иммуноцитокинов;
• Является иммунорегулятором про- и контрвоспалительных цитокинов;
• Стимулирует Т-клеточный иммунитет, восстанавливает соотношение Т-хелперы/Т-супрессоры, повышает цитотоксичность лимфоцитов;
• Увеличивает цитотоксический потенциал НК-клеток;
• Вызывает образование в организме эндогенных интерферонов. Восстанавливает активность клеток-интерферонпродуцентов;
• Вызывает неспецифическую активацию макрофагов;
• Способствует завершенному фагоцитозу;
• Способствует распознаванию антигенов макрофагами;
• Ускоряет этап презентации антигенов иммунокомпетентным клеткам;
• Сокращает время выработки антител;
• Усиливает местный иммунитет за счет снижения свободнорадикального окисления липидов и повышения стабильности цитомембран, что оказывает протекторное действие на эпителиальный покров слизистых, увеличивая конкурентную адгезию на них полезной микрофлоры;
• Способствует быстрой элиминации вирусов;
• Уменьшает иммунодепрессию, вызванную ксенобиотиками, лекарствами и канцерогенами;
• Резко сокращает частоту обострений при хронических заболеваниях, улучшает качество жизни больных;
• Повышает эффективность антибактериальных и антивирусных лекарств, хорошо совместим со всеми средствами традиционного лечения различных заболеваний, нередко уменьшая потребность в них;
• Совместим с химио- и лучевой терапией онкобольных, снижает их побочные, токсические осложнения; повышает иммунитет.
• Не вызывает аллергии, не имеет побочных эффектов, не имеет противопоказаний.
Первые препараты ТФ были выделены из крови. Для приготовления препаратов ТФ используется донорская кровь или кровь из специальных банков крови, срок хранения которой уже истек. Однако использование крови человека в качестве источника ТФ имеет много негативных моментов. В качестве альтернативного источника получения ТФ могут использоваться животные материалы, такие как кровь, селезенка и лимфатические узлы. Существует также метод получения ТФ из лейкоцитов крови. В практическом отношении более важным и более широко используемым источником ТФ является молозиво. Для промышленного получения ТФ чаще всего используется молозиво, получаемое от дойных домашних животных [2].
Первоначально препараты ТФ назначались исключительно инъекционным путем, однако, дальнейшие исследования показали, что ТФ не расщепляется в ЖКТ и сохраняет свою эффективность при пероральном применении.
Компания «4-Life research», США представила на российский рынок несколько трансфер-содержащих продуктов:
1. "Трансфер фактор-тм" классический - концентрат ТФ из молозива коров.
2. "Трансфер фактор Эдвенсд" - смесь ТФ из молозива и желтков яиц.
3. "Трансфер фактор плюс" - сочетание с растительными иммуномодуляторами (грибами кордицепс, шиитаке, маитаке, агарикус, овсом, алое, листом оливы и др.).
4. "Трансфер фактор кардио" - сочетание специфического для сердечной мышцы ТФ с витаминами, минералами и растениями-кардиопротекторами для поддержки здоровья сердечно-сосудистой системы.
5. "Трансфер Фактор Глюкоуч" - для поддержания функционирования инсулинозависимых систем организма.
В новом продукте Трансфер Фактор Эдвенсд используется Трансфер Фактор Е-XF - фирменный патентованный концентрат ТФ из молозива коров и желтка куриных яиц.
Особенность ТФ Эдвенсд заключается в том, что он содержит антиген-специфичную фракцию, которая успешно ликвидирует воспалительный процесс в сосудистой стенке даже на самых ранних стадиях воспаления.
Экспериментальные исследования, проведенные в Онкологическом Центре им. Блохина РАМН, показали, что ТФ Эдвэнсд повышает активность естественных клеток-киллеров на 283%.
Иммуномодуляция является одним из важнейших механизмов адаптационных процессов организма и может быть отнесена к механизмам специфической адаптации. Однако физиологически адаптация - значительно более широкое понятие и включает многоплановые неспецифические механизмы.
Особую актуальность и фактически жизненную необходимость приобретает проблема повышения устойчивости организма и мобилизация его резервных возможностей, а, следовательно, направленный поиск эффективных и безопасных адаптогенов. Два обстоятельства делают эту проблему исключительно важной для современной медицины. Во-первых, необходимость адаптации больших контингентов людей к высоким нервно-эмоциональным нагрузкам, действию техногенных ксенобиотиков, электромагнитных полей, последствиям гиподинамии и нерационального питания; во-вторых, профилактика и лечение неинфекционных заболеваний (онкологических, сердечно-сосудистых, обмена веществ) [5].
Дизадаптация всегда носит многоплановый характер и затрагивает одновременно многие разбалансированные звенья адаптивного ответа. В основе дизадаптации и патогенетических механизмов практически любой патологии лежит нарушение состояния и функций биомембран, состояния иммунной системы, ферментативного и неферментативного звеньев антиоксидантной системы, функционирование детоксикационных систем - ферментов семейства монооксигеназ и системы конъюгации. Становится очевидным, что повышение функционирования адаптивных механизмов возможно лишь при одновременном балансирующем воздействии на все основные звенья.
В настоящее время существует значительное количество средств, способных стимулировать защитные силы организма и тем самым повышать его работоспособность и сопротивляемость внешним факторам. Этот эффект 8
может достигаться с помощью как стимуляторов-допингов, так и стимулирующих средств - адаптогенов. Действие этих двух групп веществ на процессы клеточного метаболизма существенно различается. Эффект стимуляторов-допингов реализуется посредством возбуждения определенных структур центральной нервной системы, которые, в свою очередь, активизируют метаболические процессы, протекающие в различных органах и тканях. Действие их проявляется быстро, но оно непродолжительно. Поскольку данная форма стимуляции сопровождается истощением, она не может быть физиологической. Иная картина характерна для использования адаптогенных средств. В этом случае анаболические процессы, суть которых заключается в синтезе структурных веществ и богатых энергией соединений, превалируют над процессами катаболизма. В результате происходит физиологическая гармоничная мобилизация всех защитных сил. Эти вещества, расширяя узкие места метаболизма, предупреждают нарушение энергетических и пластических процессов в тканях. Они способны длительное время поддерживать в экстремальных условиях постоянство внутренней среды. Способность таких веществ активизировать защитные силы организма и тем самым повышать его резистентность к экстремальным агентам, дало основание выделить их в особую группу - адаптогены.
Анализируя данные об адаптогенах, можно считать, что на организменном уровне они действуют следующим образом [6]:
- тонизируют центральную нервную систему, улучшают процессы обучения, памяти, условнорефлексивную деятельность, повышают умственную работоспособность, улучшают синаптическую передачу в симпатических и парасимпатических волокнах периферической нервной системы;
- нормализуют функцию эндокринной системы организма (регуляция анаболических и катаболических процессов);
- контролируют процесс образования и расхода энергии в исполнительных клетках (мышц, печени, почек, мозга и других органов);
- восстанавливают иммуносупрессивный эффект как следствие тренировочного и соревновательного процессов, влияя на гуморальный и клеточный иммунитет;
- способствуют антиоксидантному действию в организме, предотвращая токсические процессы свободнорадикального окисления ненасыщенных жирных кислот, которые активируются при истощающей физической нагрузке;
- предотвращают гипоксию;
- обладают анаболизирующими эффектами, которые необходимо поддерживать при истощении организма, интенсивной физической работе и т. д.;
- улучшают микроциркуляцию головного мозга и работающих мышц за счет улучшения реологических свойств крови.
Как следует из основных положений теории адаптации, необходимым условием снижения риска развития патологических состояний при воздействии на организм неблагоприятных факторов является адекватность мобилизации его адаптивных механизмов. Динамическое понятие адаптации отражает процесс приспособления организма к меняющимся условиям внешней среды, обеспечивающий устойчивое существование и нормальную жизнедеятельность. С позиции физиологии человека, адаптация обозначает совокупность физиологических реакций, обеспечивающих приспособление строения и функций организма или его органов к изменению окружающей среды. Суть физиологической адаптации - в способности организма сохранить жизненно важные параметры гомеостаза, обеспечивающие его благоприятное существование в условиях стрессовых воздействий [5].
Наступление состояния адаптации характеризуется морфологическими, физиологическими и биохимическими сдвигами, возникающими на разных уровнях биологической системы (от организменного до молекулярного), и имеет в своей основе метаболическую адаптацию, то есть количественные изменения уровня обменных и энергопродуцирующих процессов [7].
На уровне целостного организма эти изменения носят системный характер и контролируются регуляторными механизмами центральной нервной системы (ЦНС) и эндокринной системы.
На клеточном уровне адаптация характеризуется соответствующими изменениями чувствительности клеточных рецепторов различных типов и соответствующих исполнительных механизмов к действию как гормонов и нейротрансмитеров, так и экзогенных биологически активных веществ.
Важными интегральными механизмами адаптации на молекулярном и клеточном уровнях являются [5]:
1. изменение состояния мембранного аппарата клетки, микровязкости липидного бислоя, селективной проницаемости,
2. состояние и активность рецепторов и ионных каналов,
3. состояние мембранных ферментных систем; в первую очередь тесно связанных и взаимодействующих между собой полифункциональных блоков, выполняющих функцию защиты организма от повреждающих факторов на всех уровнях:
• система антирадикальной и антиперекисной защиты, контролирующая уровень свободнорадикальных и перекисных процессов на клеточном, тканевом и органном уровнях;
• система микросомальных монооксигеназ как первая фаза детоксикации ксенобиотиков, которая представляет собой электронотранспортную цепь, организованную в белково-липидный комплекс, катализирующую реакцию включения атома кислорода в молекулу гидрофобных соединений. Центральным компонентом этой системы является цитохром Р-450. Метаболизированные на этой стадии гидрофобные соединения вступают во вторую, завершающую стадию детоксикации - реакции конъюгации.
клинических исследованиях ТФ-базового, проведенных в СПбГМА им. И. И. Мечникова при совместной работе кафедры биохимии, биохимического отдела ЦНИЛа и кафедры травматологии, на больных различными формами остеомиелита было показано, что ТФ, являясь иммуномодулятором, одновременно оказывал влияние на биохимические механизмы неспецифической резистентности, включая систему свободнорадикального окисления, повышал устойчивость клеточных мембран, активность антиоксидантной защиты [25]. Это позволило сформулировать представление о том, что ТФ является не только иммуномодулятором, но и обладает более широким спектром биологической активности, включая влияние на антиоксидантную систему организма, функции мембранного аппарата клетки и его адаптивные возможности. Впервые установленные и ранее не известные свойства ТФ требовали дополнительной проверки в эксперименте, который, как известно, позволяет в более стандартных условиях провести исследования указанных свойств. Такой подход является необходимым, поскольку клинические данные получены при массе неконтролируемых параметров, включая болевой стресс, характер питания, прием многочисленных лекарственных препаратов, курение, возможный прием алкоголя и т. д.
Целью данной работы и стало изучение антиоксидантных и адаптивных свойств ТФ (на примере ТФ Эдвенсд) в эксперименте.
ВЫВОДЫ
1. Проведенное исследование влияния ТФ на физическую выносливость крыс показало наличие у ТФ актопротекторного действия, которое проявлялось при приёме ТФ в течение не менее 15 дней.
2. В опытах in vivo показано влияние ТФ на активность ферментов антиоксидантной системы, а также на тиол-дисульфидную систему, приводящее к повышению восстановленных эквивалентов в клетке и, как следствие, снижению интенсивности ПОЛ.
3. По результатам опытов in vivo можно предположить наличие корригирующих эффектов ТФ, выражающиеся в нормализации активности СОД, каталазы, ГSТ, ГПО и Г-6-ФДГ при изменении их активности (повышении или понижении).
4. В опытах in vitro показано влияние ТФ на активность ферментов антиоксидантной системы, проявляющееся в снижении их активности, вероятно, за счет ТФ-белковых взаимодействий между ферментами и ТФ, приводящее к конформационным перестройкам в молекулах ферментов.
5. В опытах in vitro на основании данных по соотношению SH/SS групп в белковой и низкомолекулярной фракциях и уровню ПОЛ в плазме крови, показано, что ТФ оказывает антиоксидантный эффект только при повышенной перекисной нагрузке, т. е. в условиях оксидативного стресса.
6. Учитывая актопротекторный эффект ТФ, выражающийся в повышении физической выносливости животных, нормализующем влиянии ТФ на активность ферментов антиоксидантной системы и тиол-дисульфидную систему, а также выраженное антиоксидантное действие ТФ in vivo и in vitro в условиях оксидативного стресса, можно заключить, что ТФ может быть квалифицирован как адаптогенный и антиоксидантный продукт.
ЛИТЕРАТУРА
1. Lawerence H.S. The cellular transfer of cutaneous hypersensitivity to tuberculin in man//Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1949, 71, p. 516.
2. У. Дж. Хеннен. Трансфер Фактор-Плюс: Идеальная комбинация биологически активных веществ для оптимального иммунитета. Под редакцией Ю.П. Гичева и Э. Огановой. - Новосибирск. - 2001. - 73 с.
3. Методические рекомендации министерства Здравоохранения и Социального развития РФ «Иммунореабилитация инфекционно-воспалительных и соматических заболеваний с использованием Трансфер Фактора». - Москва. - 2004.
4. Халтурина Е. Трансфер Фактор - новое поколение иммуномодуляторов и адаптогенов//12 Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». - 2005.
5. Шабров А.В., Дадали В.А., Макаров В.Г. «Биохимические основы действия микрокомпонентов пищи». Под редакцией проф. Дадали В.А. - М.: Авваллон. - 2003. - с. 184.
6. Погорелый В.Е., Слюньковая Н.Е., Макарова Л.М., Слюньковая Т.Е. Адаптогены: прошлое, настоящее, будущее//7-й международный съезд Фитофарм 2003 «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (материалы съезда). - СПб, Пушкин. - 2003. - с. 250-257.
7. Эликсиры//Под редакцией Макарова В.Г. - СПб.: Межрегиональный центр «Адаптоген». - 1999. - с. 218.
8. Меньщикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К., Бондарь И.А., Круговых Н.Ф., Труфакин В.А. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. - М.: «Слово», 2006. - с. 576.
9. Munday R., Winterboume C.C. Reduced glutathione in combination with superoxide dismutase as an important biological antioxidant defense mechanism//Biochem. Pharmacol. - 1989. - Vol. 38. - p. 4349-4352.
10. Liochev S.I.., Fridovich I. Copper. Zinc superoxide dismutase as a univalent NO-oxidoreductase and as a dichlorofluorescin peroxidase//J. Biol. Chem. - 2001. - Vol. 276. - p. 35253-35257.
11. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. - Л.: Наука, 1985.
12. Шинкаренко Н.В., Алексовский В.Б. Химические свойства синглетного молекулярного кислорода и значение его в биологических системах.//Успехи химии. -1982. - Т. 51, № 5. - с. 713-735.
13. Kirkman H.N., Rolfo M., Ferraris A.M., Gaetani G.F. Mechanisms of protection of catalase by NADPH. Kinetics and stoichiometry//J. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274. - p. 13908-13914.
14. Ларский Э.Г. Методы определения и метаболизм металлобелковых комплексов.//Итоги науки и техники. Сер. Биологическая химия. - 1990. - Т. 41.
15. Hansen J.C., Pedersen H.S., Mulvad G. Fatty acids and antioxidants in the inuit diet. Their role in ischemic heat disease (IHD) and possible interactions with other dietary factors. A review//Arctic Med. Res. - 1984. - Vol. 53. - p. 4-17.
53
16. Link E.M. Enzymic pathways involved in cell response to H2O2//Free Radic. Res. Commun. - 1990. - Vol. 11. - p. 89-97.
17. Lands W.M. Biochemistry of arachidonic acid metabolism. Boston: Nijhoff. - 1985.
18. Meneghini R., Benfato M.S., Bertoncini C.R. et al. Iron homeostasis and oxidative DNA damage//Cancer J. - 1995. - Vol. 8. - p. 109-113.
19. Hayes J.D., Flanagan J.U., Jowsey I.R. Glutathione transferases//Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. - 2005. - Vol. 45. - p. 51-88.
20. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И. Глутатионтрансферазы//Успехи соврем. биологии. - 1989. - Т. 107, вып. 2. - с. 179-194.
21. Бондарь Т.Н., Ланкин В.З., Антоновский В.Л. Восстановление органических гидроперекисей глутатионпероксидазой и глутатион-S-трансферазой: влияние структуры субстрата. Докл. АН СССР. - 1989. - Т. 304, № 1. - с. 217-220.
22. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона//Успехи соврем. биологии. - 1990. - Т. 110, вып. 1. - с. 20-33.
23. Соколовский В.В. Тиолдисульфидное соотношение крови как показатель состояния неспецифической резистентности организма. - СПб., 1996. - с. 30.
24. Справочник: медицинские лабораторные технологии//Под редакцией Карпищенко А.И. - СПб.: «Интермедика». - 1999. - Т. 2. - с. 24-27.
25. Дадали В.А., Рак А.В., Столпник Е.С., Кельвин В. МакКослан, Оганова Э.А. Применение Трансфер Фактора в лечение больных остеомиелитом//Вестник Санкт-Петербургской государственной академии им. И. И. Мечникова. - 2002. - № 3-4.
26. Harbig W.H., Pabst J., Jakoby W.B. Glutathione-S-transferases: the first enzymatic step in mercapturic acid formation.//J. Biol. Chem.- 1974. - Vol. 249, № 22. - p. 7130-7139.
27. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н., под ред Хавинсона В.Х. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма. - СПб., 2000.
28. Lowry O. et al. Protein measurement with folin phenol reagent.//J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193. - p. 265-275.
29. Коробейникова Э.Н. Модификация определения продуктов перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой//Лабораторное дело. - 1989. - № 7- с.8-9.
30. Леонова В.Г. Анализ эритроцитарных популяций в онтогенезе человека. Новосибирск: «Наука», 1987. - с. 240.
31. Бойко Е.Р., Щадрина В.Д., Козловская А.В. Сезонные аспекты функционирования ферментативных антиоксидантных систем рожениц европейского севера.//Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2006. - М., 1992, №5, с. 633-642.
32. Соколовский В. В. Тиолдисульфидная система в реакции организма на факторы окружающей среды. - СПб., 2008. - с. 76.
33. Masaki H., Okano Y., Sakurai H. Differential role of catalase and glutathione peroxidase in cultured human fibroblasts under exposure of H2O2 or ultraviolet B light//Arch Dermatol. Res. - 1998. - Vol. 290. - p. 113-118.
34. Eaton J.W. Catalases and peroxidases and glutathione and hydrogen peroxide: Mysteries of the bestiary.//J. Lab. Clin. Med. - 1991. - Vol. 118. - p. 3-4.
35. Scott M.D., Lubin B.H., Zuo L., Kuypers F.A. Erythrocyte defense against hydrogen peroxide: Preeminent importance of catalase//J. Lab. Clin. Med. - 1991. -Vol. 118. - p. 7-16.
http://phytonet.mylivepage.ru/wiki/1299/817