Профилактика и лечение гриппа и острых респираторных вирусных инфекций. Часть 3

[bogdan_63]

Продолжаем публикацию уточненного и дополненного информационно-методического пособия д.м.н., проф. Вячеслава Сергеевича Смирнова «Профилактика и лечение гриппа и острых респираторных вирусных инфекций». Обобщенные в этой работе материалы могут быть интересны терапевтам, инфекционистам, семейным врачам, а также студентам медицинских ВУЗов, т.к. позволяют освежить свои знания. Предлагаем вниманию специалистов третью и четвертую главы издания.

Опубликованные ранее главы информационно-методического пособия В.С. Смирнова «Профилактика и лечение гриппа и острых респираторных вирусных инфекций»: 

• Введение
• Глава 1. Возбудители ОРВИ и гриппа
• Глава 2. Основные средства для профилактики и лечения гриппа и других ОРВИ

Глава 3. Что такое "Цитовир-3"?​


Новым подходом к решению проблемы профилактики и лечения гриппа и ОРВИ явилась разработка метода биорегулирующей терапии, учитывающего особенности развития заболевания и возможности воздействия на ключевые звенья противовирусной защиты. Метод основан на стимуляции факторов неспецифической защиты, в том числе синтеза эндогенного интерферона, к которому чувствительно большинство возбудителей ОРВИ и стимуляции антиоксидантных механизмов, нейтрализующих токсичные продукты жизнедеятельности вирусов. Реализация этой идеи стала возможной в результате сочетанного применения трех известных фармакологических препаратов: 

• бендазола,
• тимогена натрия,
• аскорбиновой кислоты. 

Бендазол был синтезирован в 1947 году Б.А. Порай-Кошичем и соавторами. В 1951 году было установлено стимулирующее действие бендазола на нервную систему и работоспособность, затем С.В.Аничков с сотрудниками выявили его спазмолитическое и гипотензивное действие. Позднее было установлено, что бендазол обладает также и иммуномодулирующей активностью. В частности, были продемонстрированы его способности стимулировать процессы фагоцитоза и индуцировать синтез эндогенного интерферона. В 1968 году Л.Я. Эбертом и соавторами опубликованы данные о возможности применения бендазола для профилактики гриппа. Однако в последующем были получены противоречивые результаты. Некоторые исследователи обнаруживали интерфероногенные свойства у бендазола, другие - существование таких свойств отрицали. Это противоречие удалось объяснить после установления квантового механизма синтеза интерферона, согласно которому период активного синтеза интерферона сменяется периодом замедления и развитием состояния неотвечаемости (рефрактерности). Применение индуктора в период рефрактерности не вызывает активного синтеза эндогенного интерферона. Например, назначение бендазола в рефрактерном периоде не сопровождается стимуляцией синтеза интерферона, поэтому достичь ожидаемого профилактического эффекта в этот период не удается. Несмотря на указанный недостаток, который, кстати, был выявлен только в середине 80-х годов прошлого столетия, препарат активно применялся для ликвидации эпидемий гриппа в организованных коллективах, где важно подавить эпидемические процессы циркуляции возбудителя. Это всегда удавалось сделать, поскольку время наступления рефрактерного периода у лиц, образующих коллектив, по времени не совпадает. Из этого следует, что в любом организованном коллективе у части образующих его лиц бендазол индуцирует активную выработку эндогенного интерферона. Доля таких лиц в коллективе, как правило, достаточно велика для того, чтобы прервать эпидемическую вспышку. И хотя определенная часть людей все же заболевает, однако их количество не оказывает существенного влияния на динамику эпидемического процесса.

Тимоген натрий, широко используемый при лечении вторичных иммунодефицитных состояний, в данной схеме был применен для повышения лечебно-профилактической эффективности бендазола. Показано, что интраназальная аппликация тимогена натрия в дозе 0,1 мг 3 дня подряд сопровождалась 10-кратным снижением заболеваемости в течение первого месяца после применения. Тимоген натрий также обладает способностью индуцировать выработку эндогенного интерферона. Эта способность у него выражена значительно слабее, чем у бендазола, однако тимоген натрий усиливает действие бендазола и отменяет состояние рефрактерности, о котором говорилось в предыдущем абзаце. Таким образом, совместное применение бендазола и тимогена натрия способствует оптимальной продукции эндогенного интерферона. Экспериментальные и клинические исследования подтвердили правомерность этого вывода. Одновременное внутрибрюшинное введение мышам бендазола и тимогена натрия сопровождалось увеличением содержания интерферонов альфа и бета в сыворотке крови и пятикратным увеличением устойчивости животных к заражению адаптированным вирусом гриппа.

Аскорбиновая кислота, способная связывать свободные радикалы, образующиеся в процессе жизнедеятельности вируса в организме, и таким образом повышать неспецифическую защиту организма от инфекций, послужила третьим компонентом, использованным нами при подборе оптимальной схемы профилактики и терапии гриппа. Экспериментальные исследования показали, что аскорбиновая кислота в определенной степени оптимизирует действие бендазола и тимогена натрия.

Таким образом, сочетанное применение трех известных лекарственных препаратов позволяет получать новый более высокий лечебно-профилактический эффект, недоступный каждому из компонентов в отдельности.

На основании анализа механизмов действия каждого из компонентов возникла идея использовать положительные качества каждого из них и попытаться получить синергидный эффект при их сочетанном применении (табл.2).

Подкожное введение бендазола белым мышам сопровождалось активацией синтеза интерферона, который уже спустя 2 часа находили в сыворотке и ткани легких в концентрации 10 МЕ/мл на протяжении 6 часов после однократного применения. Менее активной была стимуляция выработки интерферона после применения тимогена. Введение аскорбиновой кислоты, как и следовало ожидать, не сопровождалось достоверной активацией процесса синтеза интерферона. Наибольший эффект был получен при сочетанном одновременном введении всех трех компонентов. Так, уже через 2 часа интерферон был выявлен не только в сыворотке крови и легких, но и в головном мозгу.

Максимальная активность синтеза цитокина сохранялась на протяжении 24 часов, но даже через 36 часов в сыворотке и легких отмечалось повышенное содержание этого противовирусного белка. Полученные результаты позволили сделать вывод о том, что одновременное применение трех исследованных компонентов позволяет в максимальной степени повысить противовирусную резистентность организма и если не предотвратить, то, во всяком случае, существенно снизить вероятность развития инфекционного процесса вследствие заражения возбудителями гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций.

Таблица 2. Динамика синтеза интерферонов в тканях мышей в ответ на введение комплекса "Цитовира-3" и его компонентов
Группа животныхОбъект
сследованияСодержание ИФН, МЕ/млСроки исследования, час24624367296Опытная: Комплекс "Цитовир-3"Сыворотка102080101000Легкие10102001000Мозг0102020000Контроль-1 бендазолСыворотка10204010000Легкие10000000Мозг0000000Контроль-2 тимоген натрийСыворотка1010200000Легкие0000000Мозг0000000Контроль-3 аскорбиновая кислотаСыворотка010100000Легкие0000000Мозг0000000Контроль-4 интактные животныеСыворотка0000000Легкие0000000Мозг0000000
В справедливости этого положения убеждают результаты полевого испытания методики профилактики гриппа и ОРВИ. В этом испытании указанные препараты применялись по отдельности: бендазол перорально в таблетках по 0,02 г 3 раза в день 3 дня подряд, кислота аскорбиновая по 0,05 г перорально в таблетках 4 дня подряд, тимоген натрий по 0,1 мг интраназально в виде 0,01% раствора 3 дня подряд. В результате применения этой методики заболеваемость в группе испытуемых снизилась в 8 раз уже на 3 день после начала курса, в то время как в контрольной группе сравнения эпидемиологическая вспышка развивалась как обычно и снижение заболеваемости наблюдалось на четверо суток позднее, чем в опытной.

Эффективность приведенной схемы профилактического и лечебного применения трех лекарственных средств была подтверждена опытом лечения жителей Санкт-Петербурга на протяжении нескольких лет. Если в качестве критерия эффективности использовать уровень продаж наборов, содержавших указанные выше препараты, можно утверждать, что «Цитовир-3» занял прочное место в аптечках жителей города. В период с 1993 по 1998 гг. жители Санкт-Петербурга в осенне-зимний период приобретали в аптечной сети города не менее 100 тысяч наборов ежегодно.

Однако мы сознавали несовершенство этих наборов лекарственных средств, заключавшееся в первую очередь в сложности схемы их применения: бендазол и аскорбиновую кислоту следовало принимать перорально, а тимоген натрий - интраназально. В этой связи была проведена значительная работа по конструированию оптимальной лекарственной формы, а также простой и удобной схемы ее применения. Экспериментальное обоснование эффективности такой лекарственной формы приведено в разделе 4.
Глава 4. Экспериментальные исследования противовирусной активности "Цитовира-3"


После осознания целесообразности создания единой лекарственной формы, объединяющей все три препарата, возникла необходимость изучения противовирусной активности создаваемого комплекса. С этой целью были проведены экспериментальные исследования комплексного применения бендазола, тимогена натрия и ааскорбиновой кислоты при разных режимах дозирования. Исходный препарат для изучения представлял собой смесь трех веществ в соотношении (бендазол:тимоген натрий:аскорбиновая кислота равном 20:0,5:50). Указанные соединения смешивали в сухом виде, исследуемый препарат получали путем тщательного перетирания в агатовой ступке. Исследования, выполненные методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, показали, что все компоненты комплекса при таком методе приготовления равномерно смешивались между собой. Для последующего исследования препарат растворяли в изотоническом растворе хлорида натрия, а для перорального введения - в дистиллированной воде. Во всех экспериментах в качестве контроля использовали растворитель.

На первом этапе исследовали защитные свойства Цитовира на модели экспериментальной гриппозной инфекции. Исследования проводили на мышах, у которых воспроизводили экспериментальную инфекцию путем интраназального заражения животных вирусом гриппа типа А(H3N2) штамм Виктория/72. "Цитовир-3" вводили однократно перорально за 24 и 48 час до заражения (табл. 3).

Таблица 3. Защитная эффективность Цитовира-3
при однократном применении до заражения вирусом гриппа
Группа
животныхДоза
препарата,
мг/кгСрок
введения,
часКоличество
животныхВыживаемость,
%СГПЖ,
сут.Цитовир-35,3481070(35-93)116,3Цитовир-35,3241080(44-98)* 133,3Цитовир-316,0481060(26-83)114,9Цитовир-316,0241080(44-98)*114,9Контроль --1030(7-65)78,1
Примечание. Срок введения - время до момента заражения вирусом. СГПЖ - средняя гармоническая продолжительности жизни животных в группе. Цитовир-3 - животные, получавшие перорально раствор Цитовира-3 в дистиллированное воде. Контроль - животные, перорально получавшие аликвотное количество дистиллированной воды. Звездочкой отмечены достоверные различия с показателями контроля при р<0,05.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что Цитовир-3 при однократном пероральном применении за 24 и 48 час до заражения оказывает отчетливое защитное действие в отношении экспериментальной гриппозной инфекции. В случае однократного введения препарата за 48 час до заражения, выживаемость инфицированных мышей, по сравнению с контролем, увеличивалась на 30-40% и, в зависимости от использованной дозы препарата, составила 60-70%. Укорочение интервала между введением Цитовира-3 и последующим заражением животных вирулентной культурой до 24 час несколько повышало выживаемость инфицированных мышей. При этом, однако, доза препарата заметного влияния на его протективную активность не оказывала. Выживаемость инфицированных мышей, по сравнению с контролем возросла на 50% и составила 80%. Средняя гармоническая продолжительности жизни зараженных животных (СГПЖ) корреспондировала с процентом выживаемости. При этом максимальное значение СГПЖ отмечено при введении 5,3 мкг/кг Цитовира-3 за 24 часа. до заражения вирулентной культурой вируса.

В другой серии экспериментов оценивали лечебную эффективность Цитовира-3 при его применении в разные сроки после заражения (табл. 4).

Таблица 4. Защитная эффективность препарата Цитовир-3 при его применении после заражения
Группа
животныхДоза
препарата,
мг/кгСхема
введенияКоличество
животныхВыживаемость, 
%СГПЖ,
сут.Цитовир-35,3Схема 11030(7-65) 79,4Цитовир-35,3Схема 21050(19-81) 105,3Цитовир-35,3Схема 31030(7-65) 81,9Цитовир-3 5,3Схема 41020(2-56)75,8Цитовир-35,3Схема 51060(26-83)119,1Цитовир-316Схама 11060(26-83)81,3Цитовир-316Схама 210100(69-100)*149,3Цитовир-316Схама 31060(26-83) 75,8Цитовир-316Схама 41080(44-98)* 111,1Цитовир-316Схама 51070(35-93) 138,9Контроль--1030(7-65)78,1
Примечания. Схемы введения препарата:

• схема 1 - через 24 час после заражения;
• схема 2 - через 48 час после заражения;
• схема 3 - через 72 час после заражения;
• схема 4 - через 24 и 48 час после заражения;
• схема 5 - через 24, 48 и 73 час после заражения.

Цитовир-3 - животные, получавшие перорально раствор Цитовира-3 в дистиллированной воде. Контроль - животные, перорально получавшие аликвотное количество дистиллированной воды. СГПЖ - средняя гармоническая продолжительности жизни животных в группе. Звездочкой отмечены достоверные различия с контролем при p<0,05.

Проведенные исследования показали, что применение Цитовира-3 после заражения также способствовало повышению выживаемости мышей, инфицированных вирулентной культурой вируса гриппа А. Вместе с тем, выраженность наблюдавшегося эффекта в значительной степени зависела от дозы препарата и схемы его применения. Так, применение Цитовира-3 в дозе 5,5 мг/кг сопровождалось развитием максимального защитного эффекта только в случае введения через 24, 48 и 72 часа после заражения (схема 5). Выживаемость животных составила 60% против 30% в контроле, значение СГПЖ составило 119,1. Более выраженное защитное действие отмечалось при трехкратном увеличении вводимой дозы препарата. Так, если Цитовир-3 применяли через 48 час после заражения (схема 2), то выживали все животные группы, в то время как 70% контрольных мышей погибало; показатель СГПЖ в опытной группе достигал максимального значения и почти в 2 раза превышал значение показателя в контроле. Другие схемы введения препарата также обеспечивали достоверно высокий уровень защиты, превосходивший таковой в контроле в среднем на 30-50%.

Суммируя результаты двух серий экспериментов, необходимо отметить, что Цитовир-3 в испытанных дозах обладает отчетливым проективным действием при введении как до, так и после заражения мышей вирулентным штаммом вируса гриппа типа А.

Результаты исследований механизма действия комплекса из 3 препаратов: бендазола, тимогена и аскорбиновой кислоты, показали, что одним из возможных механизмов действия может быть стимуляция синтеза эндогенного интерферона. Для проверки этой гипотезы Цитовир-3 вводили мышам перорально в дозе 5,3 и 16 мг/кг массы в объеме 0,1 мл. Через 2, 4, 6, 24 и 48 час после введения у животных отбирали пробы крови из ретробульбарного венозного сплетения, получали из нее сыворотку, в которой определяли титр сывороточного интерферона (рис. 1).



Рис. 1. Динамика накопления интерферона в крови мышей в ответ на пероральное введение Цитовира-3 в дозах 5,3 мг/кг(1) и 16 мг/кг (2).
По оси ординат - концентрация эндогенного интерферона, ед./мл; по оси абсцисс - время после введения препарата, час.
Горизонтальной линией отмечена концентрация эндогенного интерферона в крови интактных мышей

Полученные результаты свидетельствуют о том, что введение Цитовира-3 стимулирует продукцию эндогенного интерферона в статистически достоверных концентрациях. При этом динамика его выработки зависела от вводимой дозы. Для дозы 5.3 мг/кг была характерна динамика с максимумом на 4 час после введения. У животных, получавших 16 мг/кг, этот максимумотмечался через 24 час после введения Цитовира-3. Вместе с тем, оценивая прямой противовирусный эффект Цитовира-3 (табл. 3 и 4) и динамику накопления интерферона (рис. 1), вряд ли можно отнести достигаемый эффект только на счет интерфероногенных свойств препарата. Вероятнее всего, протективное действие было обусловлено увеличением общей резистентности организма, в том числе и факторов неспецифической защиты. В правомерности этой гипотезы убеждают результаты определения в сыворотке крови мышей содержания лизоцима, миелопероксидазы и неспецифической эстеразы (табл. 5).

Таблица 5. Влияние Цитовира-3 на содержание некоторых сывороточных факторов неспецифической защиты
ПрепаратДоза,
мг/кгСрок
исследования,
сут.Концентрация в сыворотке кровилизоцима,мкг/млНЭ, отн. ед.МП, отн. ед.Цитовир-35,311,44±0,52*0,84±0,26* 0,98±0,21*31,76±1,02*1,12±0,38*1,34±0,14*51,70±1,11*0,76±0,21*1,18±0,35*71,63±1,060,42±0,170,54±0,20140,75±0,250,36±0,130,52±0,29Цитовир-31612,06±0,99*1,34±0,38*1,64±0,45*33,12±1,11*2,12±0,65*2,98±0,75*52,89±1,06* 1,64±0,352,64+0,55*72,41±0,78* 0,89±0,15*1,69±0,25*140,98±0,420,64±0,120,53±0,18Контроль-1 0,61±0,110,34±0,150,41±0,2130,76±0,160,42±0,180,52±0,2950,44±0,180,32±0,090,38±0,1370,56±0,26 0,39±0,060,69±0,25140,76±0,320,33±0,120,53±0,18Примечание. НЭ - неспецифическая нафтол-AS-ацетат эстераза; МП - миелопероксидаза. Звездочкой отмечены достоверные различия с контролем, p>0,05.
Полученные результаты в целом подтверждают гипотезу о множественности иммуномодулирующих эффектов Цитовира-3. Так, в ответ на введение препарата в дозе 5,3 мг/кг отмечалось достоверное увеличение концентрации лизоцима уже к исходу 1-х сут. максимальный эффект отмечался на 3-и сут. и только после 5-х сут. отмечалось постепенное снижение содержания лизоцима в сыворотке крови животных.

Аналогичная динамика наблюдалась и в отношении двух других факторов неспецифической защиты. Увеличение дозы Цитовира-3 в 3 раза до 16 мг/кг сопровождалось более выраженной стимуляцией выработки исследованных ферментов как по концентрации, так и по продолжительности эффекта.

Подводя итоги циклу экспериментальных исследований противовирусной эффективности Цитовира-3, следует отметить, что объединение трех препаратов в одну лекарственную форму абсолютно оправдано. Созданное комплексное лекарственное средство обладает целым рядом положительных эффектов, обеспечивающих его высокую клиническую эффективность в наблюдениях на людях.

http://vrachirf.ru/company-announce-single/25974